2',7'-二氯荧光素二乙酸酯的合成

介绍

2',7'-二氯荧光素二乙酸酯的分子式为C21H17Cl2O6，外观为，可溶于水和一些有机溶剂，如DMSO。它是一种常用的荧光探针，广泛应用于检测活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）特别是过氧化氢（H₂O₂）的生成。

图一 2',7'-二氯荧光素二乙酸酯

合成

将5-氨基-BAPTA 四甲酯（1.0g，1.82mmoles）溶解在15mL CH2Cl2中以得到澄清溶液。在10分钟内将羧基-2'，7'-二氯荧光素二乙酸酯的混合酸酐溶液（1.15 g溶于5 mL CH2 Cl2中）滴加到搅拌中的胺溶液中。反应在室温下搅拌过夜。第二天的TLC（在EtOAc中）显示转化为新产品，在暴露于氨蒸气时产生有色荧光产品（Rf=0.25，酸酐Rf=0.9）。产物在填充有200 mL 35-70μ硅胶的柱上分离，用1:1:1 CHCl3:己烷：EtOAc洗脱。在30°C下蒸发纯馏分，得到1.35 g（1.27毫摩尔；70.1%收率）纯2'，7'-二氯荧光素二乙酸酯BAPTA四甲酯。CDCl3中的NMR显示：2.4ppm，s 6H；3.6ppm，s 12H；4.15ppm，s 8H；4.2-4.35ppm，d 4H；6.8 ppm，m7H；7.3-7.4 ppm，m 4H；8.3 ppm，d 1 H；8.6 ppm，d 2H[1]。

图二 2',7'-二氯荧光素二乙酸酯的合成

将4-二甲氨基吡啶（15μmol，0.1当量）和吡啶（0.33 mmol，2.2当量）加入2′，7′-二氯荧光素（0.15 mmol，1当量）和二氯甲烷（2.0 mL）中；滴加酰氯（0.33 mmol，2.2 eq），搅拌所得溶液1小时；用水稀释，用二氯甲烷萃取，用饱和氯化铵水溶液和饱和盐水洗涤有机相，用无水硫酸镁干燥有机相，抽滤，减压除去溶剂；用少量二氯甲烷完全溶解残余物，加入约等于残余物体积的中性二氧化硅粉末，充分搅拌后，真空除去溶剂，得到粗产物-硅胶粉末，然后将其干燥装入柱中；通过硅胶柱色谱法（环己烷：乙酸乙酯=10:4，体积比）纯化产物2',7'-二氯荧光素二乙酸酯[2]。

图三 2',7'-二氯荧光素二乙酸酯的合成2

参考文献

[1]Kuhn A M ,Haugland P R .Reactive derivatives of bapta used to make ion-selective chelators[P].US19920843360,1995-09-26.

[2]林伟英,唐永和,迟涵文.一种检测活性胺的荧光探针及其应用[P].广西壮族自治区:CN202210605309.8,2022-09-02.