羰基氰化氯苯腙的农业抗菌应用

介绍

羰基氰化氯苯腙（Carbonyl Cyanide 3-Chlorophenylhydrazone，简称CCCP）是一种氧化磷酸化抑制剂，同时也是线粒体质子载体解偶联剂。分子式为C9H5ClN4，外观为黄色粉末。

羰基氰化氯苯腙

应用

羰基氰化氯苯腙抗农业病原细菌活性测定

本实验中所用的菌株为实验室‑80℃含30％甘油冻存的菌株。将冻存菌株取出，分别在农业细菌的NB固体培养基(牛肉膏：3g，蛋白胨：5g，酵母粉：1g，蔗糖：10g，琼脂：15g，蒸馏水：1L，p H7.0；121℃灭菌20min)上面进行划线，在28℃下恒温培养直到长出单菌落。分别挑取固体培养基上单菌落至农业细菌NB液体培养基(牛肉膏：3g，蛋白胨：5g，酵母粉：1g，蔗糖：10g，蒸馏水：1L；121℃灭菌20min)在28℃、180rpm恒温摇床振荡培养到对数生长期。将处于对数生长期的菌株用相应的液体培养基稀释至约10⁶ CFU/m L备用。将化合物分别用DMSO溶解，加入液体培养基中，混合均匀，配制成浓度为200μg/m L的含药液体培养基。取50μL含药培养基和相同体积的含约10⁶ CFU/m L细菌培养物加入到96孔板的孔中，最终给药浓度为100μg/m L。含等量DMSO的相同浓度100μL菌液做对照。将96孔板在28℃恒温培养箱中培养24‑48h直至对照组菌液长出，在酶标仪上测定孔中菌液的OD值(OD600)。并且另外测定100μL液体培养基和浓度为100μg/m L药剂的OD值，对培养基和药剂本身造成的OD值进行矫正。结果发现羰基氰化氯苯腙对测定菌株均表现出优异的抑制作用，在100μg/m L对水稻白叶枯病病原菌、柑橘溃疡病病原菌以及马铃薯黑胫病病原菌活性强于商业化用药噻菌铜。其中对水稻白叶枯病病原菌作用最强，MIC值最小可达1.56μg/m L。

羰基氰化氯苯腙抗农业病原真菌活性测定

本实验中所用的农业病原菌为实验室4℃保存的菌种，采用的培养基为马铃薯琼脂葡萄糖培养基(简称PDA)。PDA培养基配方：马铃薯(去皮)200g，葡萄糖20g，琼脂15g，蒸馏水1000m L，自然PH。PDA培养基配置方法：将马铃薯洗净去皮，称200g切成小块，蒸馏水煮20min左右(土豆块软而不烂)，用八层纱布过滤，用蒸馏水将滤液补足至1000m L，加入15g琼脂，20g葡萄糖，搅拌使其充分溶解后，分装于三角瓶中，121℃灭菌20分钟，冷却后备用。室内活性测定采用菌丝生长速率法。菌种活化：将农业病原菌在PDA平板上25℃培养3～6天。制备药板：将PDA培养基加热熔化，冷却至45‑50℃，分别加入不同浓度混配物制成带药平板。接种培养：在超净台中，用打孔器在培养3～6天的菌丝边缘(生长状况尽量一致)打取菌饼(直径5mm)，再用接种针挑至药板中央，然后在培养箱(25℃)中倒置培养。结果测定：空白对照组菌丝长满后，采用十字交叉法测得给药组菌丝的生长直径，计算抑制率。抑制率(％)＝(对照菌丝直径‑处理菌丝直径)/(对照菌丝直径‑菌饼直径)×100，每个浓度设置3次平行实验。结果发现羰基氰化氯苯腙特别是针对农业病原真菌番茄灰霉具有显著的抑制作用[1]。

参考文献

[1]刘映前,张保琪,赵文斌,等.羰基氰化氯苯腙在防治农业病原菌中的用途[P].甘肃省:CN202111413827.1,2022-04-12.