糜蛋白酶的作用与功能

糜蛋白酶是一种能够分解蛋白质的消化性酶，活性基团为丝氨酸，故属于丝氨酸蛋白酶。胰凝乳蛋白酶在酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸（都是芳香族氨基酸）的羧基处切断肽键，从而裂解蛋白质。

作用

胰凝乳蛋白酶是在哺乳动物及其他动物体内的消化系统中发挥作用。它是通过催化一个水解反应（在没有酶催化的情况下，反应速度非常慢）来剪切肽键。胰凝乳蛋白酶的偏好底物包括酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸以及亮氨酸和甲硫氨酸。与其他蛋白酶相似，胰凝乳蛋白酶也可以在体外水解酯键；因此可以用一些底物类似物，如N-乙酰-L-酪氨酸对硝基苯酯，来作为酶反应试剂。

生理学功能

糜蛋白酶属丝氨酸蛋白酶家族，生理学功能包括摄食蛋白的消化、血液凝固、免疫反应、信号传导、激素活化和发育，其在昆虫幼虫中肠大量表达，参与摄食蛋白的消化。有研究显示，鳞翅类昆虫中肠丝氨酸蛋白酶可降解其体内病原体苏云金杆菌的伴孢晶体蛋白，从而抵抗苏云金杆菌对昆虫的杀伤力。

纯化工艺

一种糜蛋白酶的纯化工艺，其特征在于包括以下步骤：

（1）取牛胰，将脂肪、结缔组织除去，绞碎成胰浆；

（2）向胰浆中加入硫酸溶液进行提取，过滤；

（3）滤液中加入硫酸铵至0.4饱和度，冷室中放置过夜；

（4）过滤，滤液用截留分子量50kDa的超滤膜进行超滤；

（5）滤出液用截留分子量5-10kDa的超滤膜进行超滤；

（6）截留液加硫酸铵至0.7饱和度，低温放置过夜；

（7）过滤，将滤饼溶于冷纯化水中，冷纯化水的体积数为滤饼质量数的3-5倍，加硫酸调pH为2.0，搅拌使溶解，加入饱和硫酸铵溶液，饱和硫酸铵溶液的体积数为滤饼质量数的2倍，调pH至5.0，25℃，孵育2-5h，有晶体析出，过滤收集晶体；

（8）晶体用冷纯化水加硫酸溶解，冷纯化水的体积数为晶体质量数的3-5倍，调节pH 7.6，加入胰蛋白酶，20℃活化2-4h ；

（9）调节pH 至4.0，加入固体硫酸铵使达0.7饱和度，过滤收集沉淀；

（10）沉淀用冷纯化水加硫酸溶解，用截留分子量10kDa的超滤膜进行超滤；

（11）将上述超滤脱盐的料液加至已用0.05mol/L NaAC 缓冲液平衡好的SP离子交换柱上，用3倍柱体积的含0.2 mol/L NaCl 的缓冲液洗柱，用3倍柱体积的含0.4 mol/L NaCl 的缓冲液洗脱得洗脱液；

（12）将上述洗脱液用截留分子量10-30kDa的超滤膜进行超滤，除菌，既得。

参考文献

CN102618523B