4',6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)溶液:配制,保存与安全性
发布日期:2024/10/16 13:45:07
DAPI全称为4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole),是一种能够与DNA强力结合的蓝色荧光染料,常用于细胞核染色。其发出的蓝色荧光与其他的绿色、黄色或红色荧光蛋白形成鲜明对比,因此多用于多色荧光技术。DAPI可以穿过细胞膜,因此可以用于活细胞和固定细胞的染色,但活细胞染色对DAPI浓度有严格要求,所以DAPI主要用于固定细胞染色。
DAPI溶液的配制
DAPI溶液一般使用ddH2O配制,溶液的浓度为5mg/ml,推荐DAPI溶液工作浓度为0.5-1Oμg/ml之间。
配制方法:取1mg的DAPI粉末,离心使粉末沉积在保存管底,后取1mL的ddH2O将DAPI粉未溶解,可以制备出2.9mM的DAPI溶液(1 mgDAP/1mLH2O)。此外,DAPI不可以用PBS缓冲溶液或者其他缓冲液直接进行溶解,需要先用水将其溶解。但使用时需要用PBS将DAPI储备溶液稀释。
保存
DAPI溶液应储存在避光、冷藏条件下,温度一般保持在2-8℃。避免与有机物接触,因为DAPI易溶于有机溶剂。需要在不透光的瓶子中存放。
安全性
DAPI是一种有毒物质,需要避免与皮肤和眼睛接触。实验人员需要佩戴适当的防护手套和眼镜。在DAPI处理样本时,避免直接照射荧光显微镜的激发光源到眼睛。避免长时间曝光在DAPI的荧光光源下,以免损伤细胞样本。在DAPI染色后,不宜长时间存放,最好在染色后立即观察。