DAPI溶液的用途和使用方法

背景及概述^[1]

DAPI溶液，也称DAPI dihydrochloride，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。因为DAPI是含有特定AT序列DNA的一种嵌入剂，它能像Hoechst染料一样粘附在DNA双螺旋的小沟区。

尽管DAPI不能通过活细胞膜，但却能穿透扰乱的细胞膜而对核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体DNA，叶绿体DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色体DNA。DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360nm和460nm。

DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。

DAPI溶液使用过程^[1]

1、用1mL ddH₂O将DAPI溶解，制得2.9mM的DAPI溶液（1mgDAPI/1mL H2O）。

注：DAPI不能直接用PBS等缓冲溶液溶解，需要先用水将其溶解。

2、取适量DAPI水溶液加到PBS中，制备成10~50µM的DAPI溶液。 推荐以下PBS的配制方法： 将8.00g NaCl、0.20g KCl、2.9g Na₂HPO₄·12H₂O、0.2g KH₂PO₄溶解于1L纯水中。

3、将1/10培养基体积的DAPI溶液加入到细胞培养基中。也可以1/10浓度的DAPI缓冲液代替培养基。

4、在37℃培养细胞10~20分钟。

5、用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

6、用带有360nm激发波长，460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。

应用举例^[2-3]

CN201910732262.X公开了一种快速鉴别人源细胞和小鼠源细胞的方法，包括步骤：提供人源性/小鼠源性鉴定样本，用DAPI溶液孵育，再清洗样本，然后在荧光显微镜下进行观察鉴别：细胞核存在DAPI聚集斑的是小鼠来源样本，细胞核无DAPI聚集斑的样本来源于人。本发明在试剂和材料方面的损耗成本低廉，在荧光显微镜下即可进行观察实验，成本大概在20元/样，普通实验室均可以轻易实现；本发明鉴别操作流程简单，一般实验者均可轻易掌握操作；实验结果可以在半个小时内即可得出，极大减少了时间成本；该方法弥补了现有技术的缺陷，可以在普通实验室进行人源样本和小鼠源样本的快速分辨，有效增强实验室样本鉴别频率，避免交叉污染、减少不必要的损失。

CN201410059881.4报道了一种采用双核法检测卷烟主流烟气总粒相物遗传毒性的方法，其特征在于：选用人支气管上皮细胞系BEAS-2B细胞作为评价体系，将细胞接种于培养皿中，加入卷烟烟气总粒相物样品进行暴露，暴露过的细胞经培养和甲醇溶液固定，采用DAPI溶液染色并在荧光显微镜下拍照计数，每个样品计数1000个双核细胞中含微核的细胞数量，与对照样品相比，通过分析微核增加的数量，进而判断烟气遗传毒性的大小。本发明采用烟气作用于人体的靶器官来源细胞进行卷烟烟气遗传毒性评价，针对性更强；实验过程中无需加入代谢活化体系(大鼠肝S9混合液)，荧光染色直接在细胞培养皿中进行无需转移至载玻片，具有操作简便，灵敏度高，结果可靠等特点。

注意事项^[1]

1、DAPI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

2、荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

3、为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

主要参考资料

[1] DAPI溶液配制与使用方法

[2] CN201910732262.X一种鉴别人源细胞和小鼠源细胞的方法

[3] CN201410059881.4采用双核法检测卷烟主流烟气总粒相物遗传毒性的方法