醋酸西曲瑞克的应用

背景及概述^[1][2]

醋酸西曲瑞克(cetrorelix Acetate)，又常称为西曲瑞克，是一种有效的黄体酮释放激素抑制素(LH-RH)受体拮抗剂，它能控制卵巢的刺激作用，预防不成熟卵泡过早排出，帮助受孕，因此常作注射用西曲瑞克制剂。 抗癌药醋酸醋酸西曲瑞克是一种新合成的促性腺激素释放激素(GNRH)拮抗剂，通过与内源性LHRH竞争垂体细胞上的膜受体，从而控制黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)的释放，推迟女性LH峰的出现，进而控制排卵。

醋酸西曲瑞克通过剂量依赖抑制脑垂体腺的黄体生成激素(LH)和卵泡刺激素(FSH)的分泌，抑制作用是直接的，并通过连续的治疗来维持，不引起黄体激素受体活性在初始时高涨随后下调。醋酸西曲瑞克作为第三代GnRHA有其独特的药物动力学和稳定性，大量研究表明，醋酸西曲瑞克对卵巢癌、前列腺癌、子宫纤维瘤、子宫内膜异位等疾病有较好的疗效，而且对良性前列腺肥大和卵巢过度刺激综合征有预防和改善作用。 

醋酸西曲瑞克及其类似物的制备方法早期主要是液相合成工艺，操作复杂，难以纯化，不利于工业生产、应用价值不高；目前在国内外关于醋酸西曲瑞克合成报道不多，专利CN101284863A以Fmoc-Linker-MBHA-Resin为起始原料，以Fmoc保护基的氨基酸为原料，使用20％哌啶/DMF溶液进行脱保护，并以醋酐/比啶/二氯甲烷混合溶液进行乙酰化，经切割沉降得到醋酸西曲瑞克粗品；该合成方法中常用到有毒试剂吡啶，吡啶易燃，有强烈刺激性，能麻醉中枢神经系统，对眼及上呼吸道有刺激作用，长期吸入会出现头晕、头痛、失眠及消化道功能紊乱。

醋酸西曲瑞克

应用^[3]

醋酸西曲瑞克是一种合成的十肽，主要应用于辅助生育技术，对控制性卵巢刺激的患者，防止提前排卵，醋酸西曲瑞克又常称为西曲瑞克，西曲瑞克是促性腺激素释放激素(GnRH)拮抗剂，能与内源性LHRH竞争性地结合垂体细胞膜上的受体，从而抑制垂体分泌黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)呈剂量依赖性。西曲瑞克无起始刺激效应，用药后即产生抑制，持续治疗可持续此抑制作用。西曲瑞克用于女性，可延迟LH峰从而推迟排卵。

对于卵巢刺激的妇女，本品的作用时间呈剂量依赖性，单剂量给予西曲瑞克3mg，对其抑制作用进行了为期至少4天的评估，在第4天，抑制作用约为70％，每24小时重复给予0.25mg西曲瑞克，也可维持其作用。动物试验及人体试验均显示，停止注射后，内源性的LH及FSH的分泌可迅速恢复。

检测方法^[2]

步骤1，称取醋酸西曲瑞克，加乙腈溶解，再用乙腈与硫酸盐缓冲溶液稀释，制成杂质对照品溶液；步骤2，称取醋酸西曲瑞克，加乙腈使溶解，再用乙腈与硫酸盐缓冲溶液稀释，配制成含西曲瑞克的溶液；步骤3，取杂质对照品溶液和供试品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积分别计算各杂质的含量；本方法有效地解决了分离及其制剂的有关物质的问题，本方法专属性强，重复性好，能保证及其制剂的中有关物质的可控性。

制备

1.保护氨基酸的活化方法

以Fmoc-D-Ala-氨基树脂的缩合为例，按照计算的理论氨基酸投料量称取22.36mg Fmoc-D-Ala-OH和20.74mg HBTU于离心管中，加入2ml DMF将其溶解，再用移液枪取10ul DIEA加入到离心管中，混合均匀得到活化的保护氨基酸溶液。

2.脱保护后树脂的洗涤方法

用真空泵将反应器中的脱保护溶液抽干，然后加入1/3～1/2反应器体积的DMF溶液，置于30r/min的脱色摇床上摇1min，抽干反应器中溶液再加入DMF洗涤，重复操作3次。

茚三酮显色检测合格后，将上述活化的保护氨基酸溶液加到抽干的反应器中，再将反应器置于25℃的恒温震荡器中反应20～30min。采用上述同样方法，依次缩合第2～10个Fmoc-保护氨基酸，即得到西曲瑞克前体肽I-氨基树脂。

3.西曲瑞克粗肽III的粗品收率

切割沉降后的粗品呈乳胶状态，其中含有较多的TFA盐和切割试剂，本发明采用C18色谱柱进行除盐，以便计算粗品得率。

4.醋酸西曲瑞克IV的制备

将西曲瑞克粗品III溶解并过滤，采用rHPLC法制备纯化，制备条件为：5um C18制备柱，流动相为A(0.1％乙酸/水)/B(0.1％乙酸/乙腈)，流速9ml/min，检测波长214nm，收集目标样品并冻干得到西曲瑞克多肽；将西曲瑞克多肽用1％醋酸溶解，加入到强阴离子交换树脂中室温搅拌吸附1h，取出吸附液补加醋酸含量到5％送冻干，经称量得到醋酸西曲瑞克纯品31.2mg，纯度达到99.613％，纯品收率为41.2％；分别称取转盐前后的西曲瑞克多肽各1mg，按药典方法测定醋酸含量，转盐前醋酸含量为1.56％，转盐后醋酸含量为6.9％，符合药典要求(醋酸含量范围4％～8％)，目标物醋酸西曲瑞克产品合格。

样品纯化^[2]

步骤1、树脂处理：阴离子树脂处理成醋酸根型的阴离子树脂；

步骤2、转盐：西曲瑞克粗品加水溶解，加入步骤1所得的醋酸根型的阴离子树脂，在温度为25～30℃的条件下搅拌，控制溶液的pH为2.5～3.5，过滤收集滤液；

步骤3、纯化：反相色谱柱用流动相平衡，所述流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为水溶液，所述流动相B为乙腈溶液，所述流动相A和所述流动相B均加入质量百分数为0.1％～1％的醋酸溶液，将步骤2所得的滤液上样、洗脱，并分段收集洗脱液，洗脱液浓缩后冻干或直接冻干，获得粉末状醋酸西曲瑞克纯品。

主要参考资料

[1] 张竞, 徐晓月, & 何燕. (2015). 注射用醋酸西曲瑞克的非临床安全性评价. 中国药业(11), 3-6.

[2] 姜晶晶, 高姗姗, 张洋, & 于娜. (2015). 注射用醋酸西曲瑞克用于辅助生殖91例临床评价. 中国药业, 24(23), 38-40.

[3] 门鸿芹. (2015). 克罗米芬与醋酸西曲瑞克在促排卵中抑制LH峰效果的比较. (Doctoral dissertation, 新疆医科大学).