山羊血清

背景^[1-4]

山羊血清采自健康山羊，经无菌采集、批量混合，最终过3次0.1μm过滤分装而成。山羊血清为纯天然制品，不含任何人为的添加成分，适用于科研或诊断试剂生产用。可以替代FBS用于大多数细胞系和原代细胞培养，也可用于病毒的培养和研究、鱼类细胞的培养、免疫反应中的封闭和稀释液的制备。

山羊封闭血清适用于免疫组化或者免疫荧光实验中样本的封闭。可以封闭待检样本中与蛋白质非特异性结合的位点，另外还可以封闭样品中内源性的Fc片段结合位点，阻断抗体与样品中的Fc受体结合，从而降低背景，减少假阳性。在选择封闭血清时，要注意封闭用血清中不能含有目标蛋白，且与一抗来源不同，可用与二抗相同来源的封闭血清。

山羊正常血清是用来描述来自没有用特异抗原进行免疫产生抗体的动物的血清。因此，山羊正常血清与山羊抗血清相对.正常血清包含血清蛋白的一般补体，包括存在于特定物种健康动物体内的不同种类的免疫球蛋白.提供的正常血清产品经过脂类抽提以提高透明度，经去盐和透析处理以去除包含叠氮化钠的磷酸缓冲液，并最后冻干以获得冻干粉末.正常血清非常适用于作为封闭试剂去除非特异性杂交。

山羊正常血清在检测一般或特异抗体纯化方法的时候也经常作为对照使用.瓶装血清解冻需采用缓慢解冻法：把在-15~-40℃低温冰箱中保存的血清放入4℃冰箱中解冻约1天，待全部解冻后再分装。在解冻过程中每隔约2小时可轻轻摇晃均匀(尽量避免产生气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃或更低温度进入37℃水浴解冻，这样因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀，从而使用血清的质量下降。

血清中的絮状沉淀物主要是解冻后血清中纤维蛋白及4℃长时间保存后血清中的脂蛋白变性造成的，这些絮状物不会影响血清本身的质量，可不用处理。如果必须要处理，可400g离心5分钟去除。但不宜过滤去除，因为絮状物可能阻塞滤膜。经过热处理的血清中沉淀物会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察像“小黑点”，而且由于这些“小黑点”的布朗运动在显微镜下被放大，感觉是在游动，所以经常被误认为血清被微生物污染。

通常这些小黑点不会影响细胞生长，但如果怀疑血清存在微生物污染，则应立即停止使用，更换另一批次的血清。可将适量血清用培养液稀释至10%浓度后培养1-3天，观察小黑点是否急剧增多，或取适量血清在LB平板上涂板培养观察是否产生菌落，以确定是否存在微生物污染。

应用^[5][6]

山羊血清可用于间接竞争ELISA检测：

制备抗CD58单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测山羊血清中CD58含量的间接竞争ELISA方法。方法以纯化的CD58蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗CD58单抗,并对其特异性进行鉴定;在此基础上,建立CD58间接竞争ELISA检测方法,对不同生理时期山羊血清中CD58的含量进行检测。

结果筛选出1株稳定分泌抗CD58单克隆抗体的杂交瘤细胞株G6;玫瑰花环抑制试验和Western-blotting试验表明,制备的细胞株能分泌针对CD58的特异性单克隆抗体;对间接竞争ELISA方法的反应条件进行优化后,建立了检测CD58的间接竞争ELISA方法,该方法最适可测范围为10~1000000 ng/mL,理论最低检测限为3.087 ng/mL,批内和批间平均变异系数分别为3.50%和5.22%;用建立的方法检测未发情和发情山羊血清中CD58含量分别为(32.160±3.69)和(35.929±3.08)μg/mL,怀孕山羊血清中CD58含量为(61.564±5.10)μg/mL。

结论建立了山羊血清中CD58间接竞争ELISA检测方法,该方法敏感、特异,具有良好的重复性;对不同生理时期山羊血清中CD58含量的检测表明,怀孕山羊血清中CD58含量显著高于未发情和发情山羊。

参考文献

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[4]Immunological aspects of pregnanly:Concepts and speculations using the sheep as a model.Hansen P J,Wenjun L.Animal Reproduction Science.1996

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[6]高纪振,周丽梅,王爱华,靳亚平,宋毓民,吴庆侠.山羊血清中CD58间接竞争ELISA检测方法的建立[J].西北农林科技大学学报(自然科学版),2009,37(08):25-30.