SF3B14抗体的应用

背景^[1-3]

SF3B14抗体是一种针对SF3B14蛋白的特异性抗体，在生物医学研究中具有广泛应用。SF3B14基因编码一个14 kDa的蛋白质亚基，该亚基是剪接因子3b复合体（splicing factor 3b complex）的一部分。剪接因子3b复合体与剪接体中的U2和U11/U12小核核糖核蛋白复合体（snRNP）相关联，参与mRNA前体的剪接过程。SF3B14蛋白直接与剪接因子3b复合体的亚基1相互作用，并在剪接过程中的第一步转酯化步骤中与腺苷酸结合。因此，SF3B14抗体在研究剪接体功能、RNA剪接机制以及相关疾病的发生发展中具有重要作用。

SF3B14抗体

一、基本信息

抗体名称：SF3B14抗体

靶点：SF3B14蛋白

宿主：通常为兔（Rabbit），也有其他宿主来源的抗体

同种型：如IgG

克隆性：多克隆（Polyclonal）或单克隆（Monoclonal）

标记物：未偶联（Unconjugated），也有荧光标记或其他标记物偶联的抗体

二、应用范围

SF3B14抗体可应用于多种实验技术中，包括但不限于：

Western Blot（WB）：用于检测细胞或组织裂解液中的SF3B14蛋白水平。在WB实验中，抗体的稀释倍数通常为1:500~1:1000，具体稀释倍数需根据实验条件和研究人员确认。

免疫细胞化学（ICC/IF）：用于细胞染色，观察SF3B14蛋白在细胞内的定位。

免疫组织化学（IHC）：包括石蜡切片（IHC-P）和冰冻切片（IHC-Fr），用于检测组织样本中SF3B14蛋白的表达情况。

酶联免疫吸附测定（ELISA）：用于定量检测血清、血浆或其他体液样本中的SF3B14蛋白含量。

三、产品特性

形式：液体（Liquid）

存储溶液：通常为PBS，可能含有NaCl和甘油等成分，以保持抗体的稳定性和活性。

存放说明：短期存储（1-2周）可置于4℃冰箱，长期存储应分装后置于-20℃或更低温度，避免反复冻融。

浓度：批次依赖（Batch dependent），具体浓度请参考产品标签。

应用实例^[4][5]

SF3B14抗体可以用于SF3B1在乳腺癌组织中的表达及其敲除对人ER阳性乳腺癌细胞功能的影响

检测剪接因子3B亚单位1(SF3B1)在不同分型乳腺癌中的表达量,评估其表达与临床病理学因素间的相关性。同时在体外检测SF3B1敲除后对雌激素受体(ER)阳性乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移、细胞周期和凋亡的影响。

方法:用SF3B14抗体免疫组化检测110例乳腺癌标本中SF3B1的表达,通过ROC曲线确定最佳切点值,将乳腺癌患者组织标本分为高表达组与低表达组,并与临床病理因素相关联;通过短发夹RNA(shRNA)转染ER阳性乳腺癌细胞ZR-75-30进行SF3B1敲除,将其分为敲除组(SF3B1-sh1,SF3B1-sh2组)和阴性对照组(ZR-75-30-NC组);用实时荧光定量的反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)和SF3B14抗体蛋白质印迹(Western blot)检测分别在mRNA水平和蛋白质水平验证SF3B1基因的敲除效率;用MTT法和集落形成实验评估细胞增殖能力;使用Transwell法测定细胞侵袭和迁移的能力;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;应用SPSS 20.0统计软件进行统计,计量资料采用均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,P<0.05差异具有统计学意义。

SF3B14抗体结果:共收集110例病例,Luminal A型38例(34.5%),Luminal B型38例(34.5%),HER2富集型14例(12.7%)和三阴性乳腺癌20例(18.2%),肿瘤大小多集中于T1-T2,共101例(91%),TNM分期集中于I-II,共68例(61.8%)。免疫组化结果显示:与配对的正常乳腺组织相比,乳腺癌中SF3B1的表达明显增高(P<0.01),在ER阳性乳腺癌中这种现象尤为明显;通过统计分析,SF3B1高表达与淋巴结转移有关(P<0.05),与肿瘤大小、年龄等临床病理学因素无显著相关性;ZR-75-30细胞系内源性高表达SF3B1,将其敲除序列分别导入ZR-75-30细胞系,用RT-qPCR、Western blot检测显示敲除组细胞中SF3B1的mRNA及蛋白水平明显低于阴性对照组,提示我们得到了稳定敲除SF3B1基因的细胞系;集落形成实验显示ZR-75-30细胞系中SF3B1敲除组集落形成效率显著降低;MTT法显示SF3B1敲除组吸光度值与阴性对照组相比,在72h、96h、120h明显降低(P<0.05)。Tra nswell侵袭实验显示敲除组细胞的相对侵袭率降低,分别为[(48.00%±4.91%或40.1%±3.92%)比(155.10%±2.31%),P<0.01];Transwell迁移实验显示SF3B1敲除组细胞中迁移的细胞数显著低于阴性对照组细胞[(107.00±0.85或99.10±2.88)个比(153.00±6.37)个,P<0.01];流式细胞仪检测SF3B1敲除组和阴性对照组之间细胞分布周期没有明显差异,敲除组凋亡率显著增高[(9.75%±0.27%或9.95%±0.47%)比(4.30%±0.22%),P<0.01]。

参考文献

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[2]Global cancer statistics 2018:GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J].Freddie Bray BSc,MSc,PhD;;Jacques Ferlay ME;;Isabelle Soerjomataram MD,MSc,PhD;;Rebecca L.Siegel MPH;;Lindsey A.Torre MSPH;;Ahmedin Jemal PhD,DVM.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2018(6)

[3]Global Cancer in Women:Burden and Trends[J].Lindsey A.Torre;;Farhad Islami;;Rebecca L.Siegel;;Elizabeth M.Ward;;Ahmedin Jemal.Cancer Epidemiology Biomarkers&Prevention,2017(4)

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[5]张海涛.SF3B1在乳腺癌组织中的表达及其敲除对人ER阳性乳腺癌细胞功能的影响[D].山西医科大学,2020.