不使用有机溶剂制备α-熊果苷的方法

α-熊果苷是β-熊果苷的差向异构体，其氧苷键在空间的方向与β-熊果苷的方向相比正好相反。α-熊果苷对黑色素合成酶——酪氨酸酶具有很好的抑制作用，对人体肌肤的美白作用是β-熊果苷的10倍以上，并且不会抑制人体细胞的生长，无毒副作用。经研究发现α-熊果苷对紫外线灼伤导致的瘢痕有较好的治疗功效，有较好的抗炎、修复和美白的作用。

国内外现有方法

目前，国际上主要采用酶法转化生产α-熊果苷，后提取工艺主要采用有机溶剂萃取分离未反应的对苯二酚，层析柱吸附α-熊果苷及糖，采用不同浓度甲醇洗脱分离糖及糖苷，由于后提取工艺过程复杂，成本较高，α-熊果苷的国际售价一直居高不下。国内也有一些公司生产α-熊果苷，主要采用黄单胞菌细胞催化法，后提取采用大孔吸附树脂分离提纯，亦使用有机溶剂洗脱，以及大量酸碱再生树脂，生产成本较高，产品质量不稳定，难以实现大规模生产。

制备步骤

步骤1，将淀粉类物质作为糖基供体分散在蒸馏水中，加入对苯二酚作为糖基受体进行均匀混合，并调节反应溶液的pH为5—6，加入淀粉类物质的生物酶进行反应；在步骤1中，淀粉类物质为蔗糖、支链或者直链淀粉、环糊精、麦芽糊精或者麦芽低聚糖；淀粉类物质的生物酶为蔗糖磷酸化酶、淀粉酶、环糊精葡萄糖基转移酶或者糖基转移酶；淀粉类物质与对苯二酚的质量比例为(20：1)～(1：10)，选择在40—60℃下反应24—48h；淀粉类物质的生物酶加入量按照每g淀粉类物质100—300U淀粉类物质的生物酶进行确定；

步骤2，待反应结束后，向反应溶液中加入葡萄糖淀粉酶，按照每g淀粉类物质加入1000—3000U的标准加入葡萄糖淀粉酶，50—60℃下水解5—12h，水解后副产物全部水解为α-熊果苷，此时水解后的反应溶液为对苯二酚、葡萄糖、α-熊果苷和酶的混合物；

步骤3，将步骤2水解后的反应液经过超滤膜过滤除酶后，加入酵母菌进行发酵除去反应液中的葡萄糖，再通过微滤和吸附除去杂质；发酵温度为20～35℃，发酵时间为24—48h，选择能够消耗葡萄糖，且不水解α-熊果苷的酵母菌，酵母菌的使用质量为反应液体积的1—10％(w/v，即酵母菌的质量/反应液体积)；

步骤4，经步骤3处理后的反应料液通过减压蒸发进行浓缩，至固含量浓度为40～60wt％，通过结晶得到α-熊果苷。

参考文献

[1] α-熊果苷的制备方法. CN105400851A