FYN抗体的应用

背景^[1-3]

FYN抗体是一种针对FYN蛋白的特异性抗体，它在生物医学研究和实验诊断领域发挥着不可或缺的作用。作为一种高效的检测工具，FYN抗体为科研人员提供了深入理解FYN蛋白在细胞生长、信号传导和疾病发展等方面功能的机会。

一、FYN抗体的特点

FYN抗体以其高度的特异性和灵敏度而著称，能够精确识别并结合FYN蛋白，从而实现对FYN蛋白表达水平的准确检测。这种抗体通常来源于兔子，具有高度的亲和力和稳定性，适用于多种实验条件和应用场景。

二、FYN抗体的应用

科学研究：FYN抗体在科学研究中扮演着至关重要的角色。科研人员可以利用这种抗体通过Western Blot等实验技术，检测和分析FYN蛋白在细胞和组织中的表达情况。这有助于揭示FYN蛋白在细胞生长、分化、凋亡等过程中的作用机制，进一步了解其与相关疾病的关系。

实验诊断：除了科学研究外，FYN抗体还广泛应用于实验诊断领域。通过检测患者样本中FYN蛋白的表达水平，医生可以初步判断疾病的类型和进展情况，为疾病的诊断和治疗提供重要的参考依据。

FYN抗体

三、FYN抗体的制备与供应

FYN抗体通常由专业的生物技术公司制备和供应。这些公司通过先进的免疫学和分子生物学技术，制备出高质量的FYN抗体，以满足科研和诊断领域的需求。不同供应商提供的FYN抗体可能具有不同的特性和应用范围，因此，在选择FYN抗体时，科研人员应根据自己的实验需求进行选择。

四、使用注意事项

在使用FYN抗体时，科研人员应注意以下几点：

仔细阅读产品说明书，了解抗体的特性、用途和存储条件等信息。

按照推荐的实验条件和步骤进行操作，确保实验结果的准确性和可靠性。

注意抗体的保存和运输条件，避免抗体失效或污染。

应用^[4][5]

FYN抗体可以用于Fyn在Y272位点磷酸化TOPK促进胃癌的增殖

探究Fyn与TOPK在胃癌临床样本中表达的相关性以及Fyn是否磷酸化TOPK和磷酸化位点,明确Fyn在胃癌发生发展中的角色及其中潜在的机制。

研究对象和方法:1、FYN抗体检测Fyn和TOPK蛋白在多种胃癌细胞株和正常胃粘膜上皮细胞中表达水平差异。

2、在下调Fyn表达后,采用MTT实验和软琼脂克隆形成实验(soft agar)检测沉默Fyn对胃癌细胞增殖的影响。

3、通过磷32标记的同位素实验验证Fyn是否直接磷酸化TOPK。在确认Fyn磷酸胡TOPK后,利用NetPhos3.1软件预测TOPK最有可能被Fyn磷酸化的酪氨酸位点。根据预测的酪氨酸位点合成相应肽段,同位素实验确认Fyn磷酸化TOPK位点。合成上一步确认的磷酸化位点的磷酸化抗体(p-TOPK(Y74)、p-TOPK(Y272),然后构建TOPKY74、Y272单突变和Y74Y272双突变原核表达质粒,并表达蛋白,通过体外激酶实验验证Fyn主要在Y272磷酸化TOPK。

4、通过蛋白质体外结合实验(pull-down)和FYN抗体免疫共沉淀(CO-IP)实验在细胞水平证实Fyn可直接结合TOPK。

5、通过蛋白质印迹法(Western Blot)检测沉默Fyn表达后对TOPK磷酸化水平的影响及TOPK下游信号通路分子的变化。

6、利用FYN抗体免疫组化实验检测Fyn、非磷酸化和磷酸化TOPK蛋白在胃癌患者组织中的表达水平。制备TOPK(P-Y272)抗体;胃癌临床标本96例。

7、分析Fyn和TOPK在胃癌和癌旁组织的间的表达差异,并利用癌症数据库分析Fyn和TOPK与患者总体生存期(OS)之间的关系。

FYN抗体研究结果:1、Fyn在胃癌组织和胃癌细胞中高表达且是导致胃癌患者预后不良的分子靶标。2、Fyn与TOPK表达水平成正相关及导致胃癌患者预后差。3、沉默Fyn表达可抑制胃癌细胞的增殖及克隆形成能力。4、体内外实验证实Fyn可与TOPK直接结合。5、体外激酶实验证实Fyn可在Y272位点磷酸化TOPK。6、Fyn磷酸化TOPK通过激活下游ERK信号通路促进胃癌的增殖。

参考文献

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[3]Suppression of protein tyrosine phosphatase N23 predisposes to breast tumorigenesis via activation of FYN kinase[J].Siwei Zhang;;Gaofeng Fan;;Yuan Hao;;Molly Hammell;;John Erby Wilkinson;;Nicholas K.Tonks.Genes&Development,2017(19)

[4]Fyn kinase mediates cortical actin ring depolymerization required for mast cell migration in response to TGF‐βin mice[J].Karla A.Ramírez‐Valadez;;Genaro Vázquez‐Victorio;;Marina Macías‐Silva;;Claudia González‐Espinosa.European Journal of Immunology,2017(8)

[5]彭三飞.Fyn在Y272位点磷酸化TOPK促进胃癌的增殖[D].郑州大学,2019.