尿促性素的应用与合成

发布日期:2024/5/9 9:36:35

介绍

尿促性素（hMG）为促卵泡生成素（FSH）类药物，含FSH和促黄体生成素（LH），前者可刺激卵泡发育及雌激素分泌，后者可刺激黄体发育和排卵，增强优势卵泡选择，减少卵泡数。

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尿促性素

应用

尿促性素联合克罗米芬治疗多囊卵巢综合征不孕患者效果显著，可改善激素水平和子宫内膜厚度，增强盆腔局部的血流状况[1]。

合成

陈燕燕[1]提供一种高纯度尿促性素的提取制备方法，操作简便、生产成本低，对原料的要求低，工业适应性强，获得的P-MG纯度更高，卵泡刺激素(Fo11icleStimulating Hormone,FSHD与黄体生成素(Luteotropic Hormone,LHD的比例接近1：1。高纯度尿促性素比活性以FSH计，大于8000IU/mg蛋白质，FSH:LH约为1：1。技术方案如下：一种高纯度尿促性素的提取制备方法，制备方法包括以下步骤：

(I)人绝经期促性腺激素(Human Menopausal Gonadotropin,HMG)粗制品经阴离子交换层析纯化，得到中间体I:

(2)中间体I经阳离子交换层析纯化，得到中间体II;

(3)中间体II经染料亲和层析纯化，得到高纯度尿促性素溶液。

具体步骤如下：

（1）用1000m1水溶解60gHMG粗制品，调节溶液的pH值至5.0，将此溶液上样至柱体积为1250ml的Capto DEAE层析柱（购自GE公司），层析柱预先用平衡液(0.02MPB,pH5.0)平衡好；FSH和LH不能吸附，直接流穿，收集上样流穿液，上样结束后用平衡液洗涤未吸附的蛋白，与上样流穿液合并收集。并检测洗涤液在280m处的吸光值，直至吸光值不再下降；此收集液即为中间体I。

（2）中间体I用6KD的超滤膜浓缩至约lO0ml,调整pH及电导率与CM-Sepharose阳离子交换层析平衡液一致，上样至柱体积为120ml的CM-Sepharose层析柱（购自GE公司），层析柱预先用平衡液平衡好；上样结束后用平衡液洗涤未吸附的蛋白，并检测洗涤液在280m处的吸光值，直至吸光值不再下降；再用洗脱液(0.1MHAc-NaAc+0.2MaC1,pH5.5)洗脱FSH,并检测洗脱液在280m处的吸光值，直至吸光值不再下降，共收集洗脱流出液460m1,即为中间体II。

（3）将中间体II460ml调节pH及电导率与平衡液(0.1 M NaAc,pH7.0)一致，上样至已平衡好的柱体积为35ml的Capto Blue(nigh sub)层析柱（购自GE公司）；上样结束后用平衡液洗涤未吸附的蛋白，并检测洗涤液在280m处的吸光值，直至吸光值不再下降；再用洗脱液(0.02MPB+1.5MKC1,pH9.0)洗脱FSH,并检测洗脱液在280nm处的吸光值，直至吸光值不再下降，共收集洗脱流出液70m1,即为高纯度尿促性素。将高纯度尿促性素溶液用截留分子量为6KD的超滤膜超滤浓缩后，用0.01MPB缓冲溶液(DH6.0)换盐3次，按照3%(w/v)的比例添加乳糖配制成冻干原液，冷冻干燥后得到0.84g高纯度尿促性素成品。