DICER抗体的应用

背景^[1-3]

DICER抗体是一种针对Dicer的特异性抗体，通常用于科研实验，特别是在分子生物学和细胞生物学领域。Dicer是一种核糖核酸酶，它在RNA干扰（RNAi）途径中起着关键作用，参与将双链RNA切割成短的RNA片段，即microRNA。这些microRNA进一步与RNA诱导的沉默复合物（RISC）结合，指导对特定mRNA的切割或翻译抑制，从而实现基因表达的调控。

Dicer抗体可以特异性地识别并结合Dicer蛋白，因此可以用于检测、定位和研究Dicer在细胞和组织中的表达、分布和功能。例如，通过免疫印迹（Western Blot）技术，可以检测细胞或组织提取物中Dicer蛋白的存在和表达水平；通过免疫荧光（Immunofluorescence）技术，可以在细胞水平上观察Dicer的定位和分布；通过免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）技术，可以研究Dicer与其他蛋白的相互作用等。

请注意，Dicer抗体的使用需要遵循相关的实验规范和操作指南，以确保实验的准确性和可靠性。同时，不同的Dicer抗体可能具有不同的特性，如交叉反应、特异性、亲和力等，因此在选择和使用抗体时需要根据实验需求进行仔细评估和选择。

DICER抗体

DICER抗体是一种针对DICER蛋白的特异性抗体。

抗体用途:DICER抗体主要用于免疫组织化学、免疫印迹和流式细胞术等实验中检测DICER蛋白的表达和定位。

抗体结构:DICER抗体通常是由单克隆或多克隆抗体组成，它们能够特异性地结合到DICER蛋白的特定结构域或表位上。

抗体制备方法:DICER抗体通常是通过免疫动物(如小鼠或兔)来制备的。首先，将DICER蛋白或其片段作为抗原注射到动物体内，然后从动物的血液中提取含有特异性抗体的血清。最后，通过纯化和鉴定得到高纯度的DICER抗体。

抗体应用:DICER抗体在生物学研究中具有广泛的应用，例如研究DICER蛋白在细胞分化、增殖、凋亡和肿瘤发生等过程中的作用。此外，DICER抗体还可以用于检测某些疾病(如癌症)中DICER蛋白的表达水平，从而为疾病的诊断和治疗提供依据。

应用^[4][5]

DICER抗体可以用于胃癌细胞来源的miRNA-107对髓系来源抑制细胞的调控及其机制

miRNA-107在MDSCs内靶基因的预测及验证方法1.以Target Scan、Pic Tar和mi Randa三种软件系统预测miRNA-107的靶基因。2.构建h-DICER1-3’UTR和h-PTEN-3’UTR荧光报告质粒,并和miRNA-107类似物(miRNA-107 mimics)共转染293T细胞,采用DICER抗体双荧光素酶检测试剂盒,观察报告载体的荧光强度,验证miRNA-107的靶基因。3.合成miRNA-107 mimics、miRNA-107抑制剂(miRNA-107 inhibitors)和无关miRNA(unrelated miRNA),分别转染三组HLA-DR-CD33+MDSCs,将各组HLA-DR-CD33+MDSCs在37℃、5%CO2条件下培养72小时(hour,hr)后,采用q RT-PCR法和DICER抗体Western blot法,分别检DICER1/PTEN m RNA和DICER1/PTEN蛋白表达,在HLA-DR-CD33+MDSCs中验证miRNA-107的靶基因。

DICER抗体结果1.h-DICER1m RNA-3’UTR和h-PTENm RNA-3’UTR序列中存在可与miRNA-107的种子序列互补的序列,h-DICER1m RNA-3’UTR中有6个互补序列,h-PTENm RNA-3’UTR中有2个互补序列。2.293T细胞经h-DICER1-3’UTR荧光报告质粒和miRNA-107 mimics共转染后,野生组双荧光素酶比值显著低于突变组和对照组。经h-PTEN-3’UTR荧光报告质粒和miRNA-107 mimics共转染后,野生组双荧光素酶比值显著低于突变组和对照组。3.HLA-DR-CD33+MDSCs经miRNA-107 mimics转染后,细胞内DICER1m RNA和PTEN m RNA的表达无显著变化(P>0.05),而DICER1和PTEN蛋白表达显著降低(P<0.05)。

构建野生型h-DICER1-3’UTR-WT质粒和突变型h-DICER1-3’UTR-MUT质粒,分别转染分选出的两组HLA-DRneg细胞,然后分别与富含和缺乏miRNA-107的外泌体共培养96hr。采用DICER抗体Western blot法检测DICER1蛋白相对量,流式细胞仪分别检测MDSCs成熟分化。为证实抑制DICER1基因可导致MDSCs增殖分化,进一步合成h-DICER1-si RNA和错序si RNA(scramble si RNA,scramble),分别转染分选出的HLA-DRneg细胞,后培养96hr。采用Western blot法检测DICER1蛋白相对量,流式细胞仪分别检测MDSCs增殖分化。

参考文献

[1]Cancer statistics in China,2015[J].Wanqing Chen;;Rongshou Zheng;;Peter D.Baade;;Siwei Zhang;;Hongmei Zeng;;Freddie Bray;;Ahmedin Jemal;;Xue Qin Yu;;Jie He.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2016(2)

[2]Regulating Tumor Myeloid-Derived Suppressor Cells by MicroRNAs[J].Siqi Chen;;Yi Zhang;;Timothy M.Kuzel;;Bin Zhang.Cancer Cell&Microenvironment,2015(1)

[3]Roles of miRNAs in regulating the differentiation and maturation of myeloid-derived suppressor cells[J].Jie Tian;;Ke Rui;;Shengjun Wang.Medical Hypotheses,2014

[4]Increased Levels of Granulocytic Myeloid-Derived Suppressor Cells in Peripheral Blood and Tumour Tissue of Pancreatic Cancer Patients[J].Yazan S.Khaled;;Basil J.Ammori;;Eyad Elkord;;Steven Eric Finkelstein.Journal of Immunology Research,2014

[5]任伟宏.胃癌细胞来源的miRNA-107对髓系来源抑制细胞的调控及其机制[D].郑州大学,2019.