茜草饮片中羟基茜草素的测定及其研究进展

简介

羟基茜草素（Purpurin）是一种蒽醌类化合物，来源于茜草，具有抑制透明透明质酸结合蛋白自体活动和抗真菌等作用。茜草为茜草科植物茜草的干燥根及根茎，具有凉血、化瘀、止血、通经之功能。

检测方法^[1]

一、色谱条件及适用性

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250mmx4.6mm,5um)；流动相为甲醇-乙腈-0.2%磷酸(25:52:23)；流速：1.0 mL/min；检测波长：250nm；柱温：30℃。在此色谱条件下，大叶茜草素和羟基茜草素的保留时间分别为16.5min和4.9min，茜草饮片中其他色谱峰对大叶茜草素和羟基茜草素峰无干扰，峰行尖锐，基线平稳。

二、对照品溶液的制备

2.1大叶茜草素贮备液的制备：精密称取经五氧化二磷减压干燥12h的大叶茜草素对照品25mg，置5mL量瓶中，加甲醇制成含秦皮甲素5 mg/mL的贮备液A，摇匀即得。

2.2羟基茜草素贮备液的制备：精密称取羟基茜草素10mg，置10mL量瓶中，加甲醇制成含羟基茜草素1mg/mL的贮备液B，摇匀即得。

2.3混合对照品溶液的制备:分别精密移取500 u L贮备液A和1mL贮备液B,置25mL量瓶中,加甲醇制成含大叶茜草素和羟基茜草素分别为100ug/mL和40 ug/mL的混合溶液，摇匀即得。

2.4供试品溶液的制备

取茜草样品粉末(过二号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100mL，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理30 min(功率250W，频率40kHz)，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液A用于大叶茜草素的含量测定。再精密量取续滤液50mL，蒸干，残渣加甲醇-25%盐酸(4:1)混合溶液20mL溶解，置水浴中加热回流水解30min，立即冷却，加入三乙胺3mL，混匀，转移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液B用于羟基茜草素的含量测定。供试品溶液使用前均以0.45um微孔滤膜过滤，进样。

研究进展^[2~4]

1、大多数植物染料分子结构中含有多个羟基，可以作为金属离子的配位体。羟基蒽醌类也能与金属离子配位，在一定条件下可以制备金属络合植物染料。茜草色素是从茜草根和其他茜草科植物中分离出的天然色素。其中，羟基茜草素是其主要成分之一，属羟基蒽醌结构。在一定条件下使羟基茜草素与硫酸亚铁发生配位反应，可制备铁络合羟基茜草素络合染料P-Fe。齐迪等人以铁离子络合羟基茜草素制备的络合染料（P-Fe）为研究对象，研究了P-Fe络合染料对羊毛织物的染色性能。

2、茹晓等人在研究羟基茜草素对大鼠膝骨关节炎（OA）的软骨保护及抗炎作用，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)评估羟基茜草素对软骨细胞的毒性作用。结合Swiss Target Prediction.SuperPred.Sea.GeneCards.OMIM数据库筛选羟基茜草素治疗OA的潜在作用靶点，用AutoDock Vina 和Pymol软件对羟基茜草素与交集靶点进行分子对接。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测软骨细胞炎症相关基因和特征性基因的相对表达量。结果发现羟基茜草素对大鼠OA具有软骨保护作用，可减轻软骨细胞的炎症反应，可能是潜在的治疗关节炎药物。

3、侯滔等人采用HT-29细胞培养，以其高表达的GPR35受体为靶标，通过无标记细胞靶点药理学技术检测羟基茜草素对GPR35受体的激动活性，研究结果表明，羟基茜草素在HT-29细胞上能够引起DMR响应，且响应曲线类型与GPR35受体激动剂敏喘宁一致。此外，在HT-29细胞上羟基茜草素对GPR35受体激动剂敏喘宁有脱敏作用，GPR35受体拮抗剂ML145对羟基茜草素有拮抗作用。由此可以推断羟基茜草素为GPR35受体的激动剂。

参考文献

[1] 李芙蓉,陈世忠,罗世恒,等. UFLC法测定茜草中羟基茜草素和大叶茜草素[J]. 中草药,2010,41(12):2087-2089.

[2] 齐迪,丁洪,王祥荣. 羟基茜草素络合染料对羊毛的染色性能[J]. 印染,2022,48(6):23-27.

[3] 茹晓,钟秋伶,黄源钧,等. 羟基茜草素对大鼠膝骨关节炎的软骨保护及抗炎作用研究[J]. 广西医科大学学报,2023,40(4):594-602. DOI:10.16190/j.cnki.45-1211/r.2023.04.011.

[4] 侯滔,丁辉,史丽颖,等. 羟基茜草素对GPR35受体激动活性的研究[J]. 世界科学技术-中医药现代化,2015(7):1414-1418. DOI:10.11842/wst.2015.07.015.