HO-8910的应用

背景^[1-3]

HO-8910是一种人源卵巢上皮癌细胞系，由中国医学科学院肿瘤研究所进行分离和鉴定。这种细胞系常用于研究卵巢癌的发生机制、治疗方法和药物筛选等方面。

HO-8910细胞的形态特征为：细胞呈悬浮生长，以单层为主；细胞形态呈多样性，包括梭形、圆形或椭圆形；细胞核呈椭圆形或卵圆形，核浆比较丰富；细胞质呈淡染色，有时呈微淡嗜复染色；细胞大小一致或略有差异，细胞直径约为20-25微米。

此外，HO-8910细胞的培养环境需要空气、95%的CO2和5%的37℃温度，使用RPMI-1640基础培养基，并添加10%的FBS和1%的P/S。在传代过程中，需要使用0.25%的胰蛋白酶溶液（含EDTA）进行消化，并在显微镜下观察细胞形态，当细胞变圆有间隙时即可终止消化。

HO-8910

HO-8910细胞系培养操作

1)复苏HO-8910细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)HO-8910细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)HO-8910细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

HO-8910可以用于扶正抗癌汤含药血清联合顺铂对人卵巢癌HO-8910细胞凋亡的机制研究

从细胞水平探索中药复方扶正抗癌汤联合顺铂对卵巢癌HO-8910细胞凋亡的影响及作用机制。为扶正抗癌汤联合顺铂治疗卵巢癌提供实验依据。

材料与方法:1.观察不同浓度扶正抗癌汤含药血清对人卵巢癌HO-8910细胞增殖的影响扶正抗癌汤含药血清的制备:将SPF级SD大鼠(雄性)20只随机分为两组,每组10只,适应性喂养一周后开始灌胃,将购买的扶正抗癌汤浓缩6倍后,按人等效剂量的9倍予以灌胃,选择一组大鼠每只灌胃4.05ml浓缩后的扶正抗癌汤,连续灌胃10天,并标记为含药血清组;剩下的一组大鼠每只灌胃4.05ml生理盐水,连续灌胃10天,并标记为空白血清组。灌胃第十天时,于给药后1h,水合氯醛腹腔注射,麻醉后取血,分别制备含药血清与空白血清冷藏以备用。将人卵巢癌HO-8910细胞接种于96孔板,再将扶正抗癌汤含药血清与空白血清按照1:0、1:1、1:3的比例进行配比,依次标记为高浓度组、中浓度组、低浓度组后分别干预人卵巢癌HO-8910细胞24h,并用MTT(3(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)法进行检测,观察不同浓度扶正抗癌汤含药血清对人卵巢癌HO-8910细胞增殖的影响。

2. 观察扶正抗癌汤含药血清联合顺铂对人卵巢癌HO-8910细胞的影响将人卵巢癌HO-8910细胞随机分为空白对照组、扶正抗癌汤含药血清联合顺铂组和顺铂组,并根据MTT结果显示,选取扶正抗癌汤含药血清最适浓度联合顺铂和顺铂分别干预人卵巢癌HO-8910细胞。分别用CCK8法检测各组细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;免疫细胞化学法检测各组细胞FAS(凋亡蛋白-1)、FAS-L(FAS配体)表达情况;Western-blot法检测各组细胞Caspase-3(半胱氨酸蛋白酶-3)、Caspase-8(半胱氨酸蛋白酶-8)蛋白表达情况。

结果:1.不同浓度扶正抗癌汤含药血清对人卵巢癌HO-8910细胞增殖的影响从MTT结果可以看出,扶正抗癌汤含药血清对人卵巢癌HO-8910细胞的增殖具有抑制作用,且高浓度扶正抗癌汤含药血清干预人卵巢癌HO-8910细胞时抑制作用最佳(p<0.01)。

3. 扶正抗癌汤含药血清联合顺铂对人卵巢癌HO-8910细胞的影响CCK8检测结果显示,与空白对照组相比,各组细胞OD值(光密度值)均明显降低,差异具有统计学意义(p<0.01),且扶正抗癌汤联合顺铂组与顺铂组细胞的OD值相比,差异同样具有统计学意义(p<0.01);流式细胞术结果显示,与空白对照组相比,各组细胞凋亡率均有上升,差异具有统计学意义(p<0.01),扶正抗癌汤联合顺铂组与顺铂组细胞的凋亡率相比,差异也具有统计学意义(p<0.01);免疫细胞化学法结果显示,与空白对照组相比,各组细胞FAS、FAS-L的表达均有上升,差异具有统计学意义(p<0.01),扶正抗癌汤联合顺铂组与顺铂组细胞的FAS、FAS-L表达之间也具有统计学差异(p<0.01);

结论:1.高浓度扶正抗癌汤含药血清对人卵巢癌HO-8910细胞的增殖抑制作用最佳。2.扶正抗癌汤含药血清联合顺铂可以抑制人卵巢癌HO-8910细胞的增殖,并增加HO-8910细胞的凋亡。3.扶正抗癌汤含药血清联合顺铂通过上调HO-8910细胞中FAS、FAS-L的蛋白表达水平,使FAS/FAS-L通路活化,进一步使Caspase-3、Caspase-8激活,从而促进HO-8910细胞的凋亡。

参考文献

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