兔骨髓单核细胞的应用

背景^[1-3]

兔骨髓单核细胞是一种来源于兔骨髓的单核细胞系，常用于研究免疫系统和炎症反应等。该细胞系具有以下特点：

来源：兔骨髓单核细胞系来源于兔骨髓，经过多次传代和筛选，形成了一个相对稳定的细胞系。

形态特征：兔骨髓单核细胞呈不规则形状，大小约为10-20微米，胞质丰富，核大而圆，核仁明显。

生长特性：兔骨髓单核细胞生长迅速，传代周期约为24-48小时，可在含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中稳定生长。

免疫表型：兔骨髓单核细胞表达多种免疫表型分子，如CD14、CD16、CD32、CD68、CD163、MHC-II等，可用于鉴定其单核细胞特性。

其他特性：兔骨髓单核细胞还具有一定的增殖能力，可用作研究免疫系统和炎症反应的模型。

兔骨髓单核细胞

兔骨髓单核细胞培养操作

1)复苏兔骨髓单核细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)兔骨髓单核细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)兔骨髓单核细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

兔骨髓单核细胞可以用于自体骨髓干细胞移植治疗兔糖尿病下肢缺血性疾病的实验研究

糖尿病兔骨髓干细胞动员及影响目的:通过监测健康兔、糖尿病兔及未成模兔三组应用相同剂量粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员后的外周血单个核细胞数、兔骨髓单核细胞及骨髓粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)培养计数,对比三组的动员效果有无差别,以探讨糖尿病对骨髓干细胞动员有无影响。通过比较糖尿病动物模型在动员前后血红蛋白、血小板、空腹血糖、血液流变学等各项指标的变化情况,探讨骨髓干细胞动员对糖尿病的影响。

方法:健康新西兰兔,随机分为A、B、C三组。A组为健康兔10只,B组为糖尿病兔10只,C组为未成模兔5只(ALX剂量同B组)。A、B、C三组在动员前分别测外周血兔骨髓单核细胞,然后三组分别皮下注射10ug/kg G-CSF进行动员,每天1次,连续5天。在应用G-CSF动员期间,每天检测三组外周血单个核细胞数,观察各组动员效果,动员第6天检测三组外周血单个核细胞数,同时三组均抽取骨髓液3ml,分离骨髓单个核细胞,检测兔骨髓单核细胞,并进行CFU-GM培养。B组(糖尿病组)中的10只糖尿病兔在动员前及动员第6天分别监测血红蛋白、血小板、空腹血糖、血液流变学变化情况。

结果:1.动员前三组外周血单个核细胞数无差别。动员后三组外周血单个核细胞均较前明显升高,计数比较无统计学差异。动员后三组兔骨髓单核细胞计数比较无差别。2.CFU-GM培养发现,三组均在培养的5～6天开始有集落形成,以后数目逐渐增多,大约12天达高峰,此后集落不断增大,总的集落数不再增加,三组集落培养计数无差别。3.动员前后10只糖尿病兔的晨空腹血糖值有一定的下降趋势,血红蛋白、血小板均有所升高,但变化均无统计学差异。10只糖尿病兔的晨空腹血流变中的血浆粘度及红细胞聚集性动员前后无明显变化;全血粘度动员后较动员前均明显升高。

参考文献

[1]Comparison of standard surface chemistries for culturing mesenchymal stem cells prior to neural differentiation[J].Mai Ho;;Diana Yu;;Marie C.Davidsion;;Gabriel A.Silva.Biomaterials,2006(24)

[2]Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells.The International Society for Cellular Therapy position statement[J].M Dominici;;K Le Blanc;;I Mueller;;I Slaper-Cortenbach;;Fc Marini;;Ds Krause;;Rj Deans;;A Keating;;Dj Prockop;;Em Horwitz.Cytotherapy,2006(4)

[3]Caveolin Plays a Central Role in Endothelial Progenitor Cell Mobilization and Homing in SDF-1–Driven Postischemic Vasculogenesis[J]..Circulation Research,2006(9)

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[5]康素娴.自体骨髓干细胞移植治疗兔糖尿病下肢缺血性疾病的实验研究[D].河北医科大学,2009.