头孢霉属通用PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

头孢霉属(Cephalosporin)是一类广谱抗生素，常用于治疗多种细菌感染。头孢霉属通用PCR试剂盒是一种用于扩增DNA的试剂盒，可以用于检测和鉴定多种细菌的基因。

头孢霉属通用PCR试剂盒通常包含以下成分：

PCR缓冲液：用于提供反应所需的pH值和离子浓度。

dNTPs:用于合成DNA的原料。

Taq DNA聚合酶：用于扩增DNA的酶。

引物：特异性地结合到目标基因上的短片段，用于引导PCR反应。

MgCl2:用于稳定Taq DNA聚合酶的活性。

琼脂糖或凝胶：用于分离PCR产物。

使用头孢霉属通用PCR试剂盒时，首先需要提取待测细菌的DNA，然后将提取的DNA与引物混合，加入PCR反应体系中进行扩增。PCR反应结束后，将产物进行电泳分离，根据产物的大小和数量来判断是否存在头孢霉属基因。

需要注意的是，头孢霉属通用PCR试剂盒只能检测到头孢霉属基因的存在，不能确定具体的头孢霉属菌株。如果需要鉴定具体的菌株，需要使用特异性引物进行PCR扩增。

头孢霉属通用PCR试剂盒

头孢霉属通用PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据头孢霉属通用PCR试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在头孢霉属的感染。

应用^[4][5]

头孢霉属通用PCR试剂盒可以用于福州温室黄瓜枯萎病微生态研究

根据真菌形态特征,从温室黄瓜不同生态位初步鉴定出的丝状真菌35属,酵母菌6属,其中根际初步鉴定出25属,以镰刀菌属、青霉属、木霉属为优势菌。患病植株各生育期根际真菌种类均少于正常植株,在花期,黄瓜枯萎病发病处于高峰期时,患病植株的根际真菌多样性水平降到最低。病株的根、茎维管束真菌以镰刀菌为主,但种类较正常植株少;枯萎病株叶栖真菌以木霉为主;枯萎病植株的花表、果表的以酵母菌为主,真菌多样性较正常植株丰富。根据放线菌形态特征,从温室黄瓜根际共分离并鉴定出放线菌15个属,以链霉菌属、链轮菌属为优势菌。正常根际全生育期都存在链轮菌属、链霉菌属,而病害根际在前期以链霉菌属为主,末期才分离到链轮菌属。根据细菌形态特征、生理生化及头孢霉属通用PCR试剂盒16 srDNA序列,从温室黄瓜根际分离并鉴定出的细菌种类有9属。主要种类为芽孢杆菌,似杆菌类群,假单胞菌,短稳杆菌,类球红细菌,奇异变形菌。病菌降低的黄瓜根际细菌种类丰富度。T-RFLP及头孢霉属通用PCR试剂盒PCR-DGGE方法对黄瓜枯萎病、根结线虫病、黄瓜枯萎病与根结线虫病复合侵染的根际细菌的多样性进行分析。

在头孢霉属通用PCR试剂盒PCR-DGGE分析中发现,除枯萎病和根结线虫复合侵染样品外,假单胞菌是优势菌。T-RFLP及PCR-DGGE方法则显示病菌提高了根际细菌种类丰富度,只是细菌种群的均度下降。黄瓜患枯萎病后,亚硝化细菌、硝化细菌、纤维素分解细菌、氨化细菌、硫化细菌等功能菌群数量相应减少,反硝化细菌、反硫化细菌功能菌群数量相应增加,而自生固氮菌变化不稳定。秋茬患病植株功能菌群数量减少幅度比春茬减少幅度大。黄瓜感染枯萎病后,黄瓜根际过氧化氢酶活性、脲酶活性、纤维素酶活性、碱性磷酸酶活性减弱。

参考文献

[1]Analysis of microbial community functional diversity using sole-carbon-source utilisation profiles–a critique[J].Juliet Preston-Mafham;;Lynne Boddy;;Peter F Randerson.FEMS Microbiology Ecology,2002(1)

[2]Factors influencing the cultivability of lake water bacteria[J].Ingeborg Bussmann;;Bodo Philipp;;Bernhard Schink.Journal of Microbiological Methods,2001(1)

[3]Methanotrophic diversity in an agricultural soil as evaluated by denaturing gradient gel electrophoresis profiles of pmoA,mxaF and 16S rDNA sequences[J].Anne Fjellbirkeland;Vigdis Torsvik;Lise?vre?s.Antonie van Leeuwenhoek,2001(2)

[4]Assessment of arbuscular mycorrhizal fungi diversity in the rhizosphere of Viola calaminaria and effect of these fungi on heavy metal uptake by clover[J].C.Tonin;;P.Vandenkoornhuyse;;E.J.Joner;;J.Straczek;;C.Leyval.Mycorrhiza,2001

[5]余文英.福州温室黄瓜枯萎病微生态研究[D].福建农林大学,2010.