MCF-12F 人乳腺上皮细胞系的应用

背景^[1-3]

MCF-12F人乳腺上皮细胞系，英文名称是MCF-12F cell line。以下是其相关信息的简介：

MCF-12F人乳腺上皮细胞系的保存条件为低温避光，纯度规格为1×10(6)viable cells/ml，产品类别是有机化学品。MCF-12F细胞系来自女性乳腺上皮细胞，其细胞形态为上皮细胞样。体外细胞培养实验证明，该细胞系可以持续进行贴壁生长。在实验操作中，为预防细胞污染，需要进行无菌操作，如实验前对超净台用紫外灯照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超净台台面，并开启超净台风扇运转10min左右再开始实验操作。

MCF-12F细胞系的主要特点是表达高水平的雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)，同时缺乏人类表皮生长因子受体2(HER2)的表达。这些特性使得该细胞系成为研究乳腺癌内分泌治疗的重要工具之一。此外，MCF-12F细胞系还可以用于研究乳腺癌的发生机制、药物筛选、肿瘤生物学等方面的问题。

MCF-12F人乳腺上皮细胞系

MCF-12F人乳腺上皮细胞系培养操作

1)复苏MCF-12F人乳腺上皮细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)MCF-12F人乳腺上皮细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)MCF-12F人乳腺上皮细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

MCF-12F人乳腺上皮细胞系可以用于Caveolin-1单倍不足对人乳腺上皮细胞周期蛋白调控的影响

利用基因捕获技术得到稳定传代的Cav-1单倍不足(haploinsufficiency)乳腺细胞株(MCF10A-ST1,MCF10A-ST3),Cav-1的mRNA和蛋白质表达均明显降低,并且也已经证实Cav-1的单倍不足足以诱导人乳腺上皮细胞发生部分转化。但是,其细胞机制尚不完全清楚。乳腺癌细胞的生长受多种因素调控,如细胞周期失调,细胞增殖过度以及内分泌失衡等。近来的研究表明,CyclinD1过表达是乳腺癌细胞恶性转化的重要事件。在乳腺癌发生过程中,CyclinD1的聚集持续存在于乳腺癌进展的各个方面阶段,它作为细胞周期调节因子之一,在乳腺癌发生过程中起着关键性作用。

本实验以正常人乳腺上皮细胞株(MCF10A)、MCF-12F人乳腺上皮细胞系、Cav-1单倍不足乳腺上皮细胞株(MCF10A-ST1,MCF10A-ST3)以及乳腺癌细胞系(MCF7)和MCF-12F人乳腺上皮细胞系为研究对象,应用流式细胞仪检测细胞周期时相,Westernblot方法检测了细胞周期相关蛋白及转录因子的表达以及RT-PCR的方法观察CyclinD1mRNA水平的变化,探讨了Caveolin-1的表达水平与乳腺细胞周期调控的关系及其可能的分子机制。阐明Caveolin-1在人正常乳腺细胞早期转化中的部分作用机制,为进一步揭示乳腺癌发病机理提供直接的科学依据。

结果如下:(1)Cav-1在单倍不足细胞株MCF10A-ST3和MCF10A-ST1的表达分别为MCF10A的50%和30%,而在乳腺癌细胞系MCF7和MCF-12F人乳腺上皮细胞系中几乎没有检测到Cav-1的表达;(2)Cav-1单倍不足细胞时相发生改变,MCF10A-ST3细胞株G1期和S期细胞数分别为35.4%和56.4%;(3)Cav-1单倍不足乳腺细胞株中,随着Cav-1的下调,CyclinD1的蛋白和mRNA水平均增加,P21的表达下调,而P16的表达水平没有受到影响;(4)Cav-1单倍不足可以激活c-Jun、ER-α的表达,从而促进细胞增殖,肿瘤发生。

参考文献

[1]Oestrogen-mediated tyrosine phosphorylation of caveolin-1 and its effect on the oestrogen receptor localisation:An in vivo study[J]..Molecular and Cellular Endocrinology,2005(1)

[2]Wild-type p16INK4a suppresses cell growth,telomerase activity and DNArepair in human breast cancer MCF-7 cells[J].Jianming Duan;;Zhong Chen;;Pinghu Liu;;Zongyu Zhang;;Tanjun Tong.International Journal of Oncology,2004(6)

[3]Genomic organization and transcriptional analysis of the human genes coding for caveolin-1 and caveolin-2[J].Anna M.Fra;;Elena Pasqualetto;;Mita Mancini;;Roberto Sitia.Gene,2000(1)

[4]Cyclin D1 overexpression in invasive breast cancers:correlation with cyclin-dependent kinase 4 and oestrogen receptor overexpression,and lack of correlation with mitotic activity[J].Yasuko Takano;;Haruyuki Takenaka;;Yo Kato;;Mitsunobu Masuda;;Tetsuo Mikami;;Makoto Saegusa;;Isao Okayasu.Journal of Cancer Research and Clinical Oncology,1999(8-9)

[5]张洪.Caveolin-1单倍不足对人乳腺上皮细胞周期蛋白调控的影响[D].辽宁师范大学,2008.