微波辐射抗原修复试剂盒的应用

背景^[1-3]

微波辐射抗原修复试剂盒是一种生物技术工具，主主要用于帮助解决由于化学试剂作用和热作用导致抗原封闭或肽链扭曲的问题。这种试剂盒通过微波辐射技术，能够帮助将封闭的抗原重新暴露出来或修正过来，以便在免疫组化的染色过程中能够更清晰地显示出目标抗原。

在使用微波辐射抗原修复试剂盒的过程中，通常需要将玻片浸入含有微波抗原修复液的容器中，然后在微波炉内以750W的功率辐射10分钟。修复液恢复至室温后，需要用PBS清洗三次，每次两分钟。最后，可以按照选定的免疫组化染色方法进行染色。

微波辐射抗原修复试剂盒

微波辐射抗原修复试剂盒操作步骤：

1.切片脱蜡至水：将切片放入二甲苯中脱蜡10分钟，然后依次用无水乙醇、95%乙醇、70%乙醇和50%乙醇各浸泡2分钟，最后用蒸馏水洗2次。

2.切片入H2O2甲醇溶液处理切片10min。

3.自来水洗，蒸馏水洗。

4.PBS洗3次，每次1min。

5.滴加或将玻片浸入微波抗原修复液，微波炉内750W辐射10min。

6.修复液恢复至室温后，PBS洗3次，每次2min。

7.按选好的免疫组化染色方法进行染色。

注意事项：

由于组织固定方法和时间长短与强度不同，抗原修复所需的消化时间会有很大差异。

确保在使用微波抗原修复液时，其温度恢复到室温后再进行下一步操作。

其他自备材料可能包括蒸馏水、PBS磷酸盐缓冲液（0.01M，pH7.2～7.4）和恒温箱。

应用^[4-5]

微波辐射抗原修复试剂盒可以用于牵张成骨过程中被动牵拉延长神经的变化机理研究

初步尝试微波辐射在免疫荧光组织化学染色中的应用。

方法：动物模型选用日本大耳白兔,于右后肢安装单臂外固定支架并实施胫骨干上1／3截骨术,以制备肢体延长模型。术后7天开始延长,速率为1mm／d(0.5mm／d,2次／d),共计10天完成延长胫骨1cm。动物模型在延长及矿化过程中应用X线摄像观察延长区域骨痂生长情况；矿化期0,7,14,28,56天分设实验组。制备火棉胶包埋薄型化横断连续切片,于典型层面观察新生骨及其周围组织结构的位置关系及进行主要参数的测量分析；取材牵拉延长的胫神经,石蜡包埋切片进行HE染色,新鲜取材组织进行透射电镜的超微组织结构观察；石蜡切片免疫组化和双重免疫荧光染色,检测NGF及其受体p75NGFR在矿化期不同时相的表达情况。应用微波辐射抗原修复试剂盒微波进辐射进行抗原修复和免疫荧光检测。

结果：1.动物模型成功制备；随矿化期延长,动物关节活动逐渐恢复改善；X线动态观察骨痂影像逐渐清晰,骨痂量逐渐增加,两端的骨皮质汇合,逐渐出现骨髓腔,皮质骨和髓腔分界清楚,最后骨痂坚强愈合,延长肢体力线佳,没有出现畸形愈合；

2. 延长部位横断面的断层切片观察结果：以延长骨为中心观察周围各种组织的位置关系及变化,测量新生骨的实际生长面积以及新生骨与周围神经和血管的径线并进行比较分析,了解肢体延长过程中各组织的适应情况；

3. 牵拉延长神经表现为牵拉外力导致的神经损伤和修复过程。早期,光镜下可见神经纤维排列紊乱、郎飞氏结区增宽、髓鞘肿胀,可见神经纤维扩展性脱髓鞘电镜下神经纤维髓鞘板层结构疏松,可见空泡状髓鞘变性及环形小体,可见肿胀压迫轴突；延长后7天,光镜下神经纤维出现轻度修复性变化,电镜下可见新生髓鞘；随矿化期时间的延长,神经损伤逐渐自我修复,至矿化56天神经纤维结构基本恢复正常,但仍可观察到新生髓鞘。

4. NGF和p75NGFR在胫骨延长后不同矿化时期表达不同,基本表达规律为矿化早期(D7和D14组)位于轴索外层的雪旺氏细胞表达呈现强阳性,达到高峰,而DO组和D28组呈弱阳性或阴性表达,至D56组几乎检测不到。

5.微波辐射和微波辐射抗原修复试剂盒应用于免疫荧光检测可以大量节约实验时间,染色效果较佳。

参考文献

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[5]邵珩.牵张成骨过程中被动牵拉延长神经的变化机理研究[D].天津医科大学,2010.