青刀豆中毒死蜱代谢物磷酸二乙酯的检测方法

背景技术

广西是全国青刀豆的主要生产区，每年大量出口青刀豆为原料制成的青刀豆罐头。毒死蜱是青刀豆种植过程中主要使用的有机磷农药。毒死蜱(CP)等有机磷农药因为植物体自身的代谢作用降解成为磷酸二乙酯(DEP)、二乙基硫代磷酸酯(DETP)等烷基磷酸酯并存在于植物体内，其中磷酸二乙酯的含量常作为毒死蜱等多种有机磷农药的生物标志物，用来监测生物对毒性物质的接确水平。

磷酸二乙酯是阴离子表面活性剂的重要原料之一，这类表面活性剂中由于磷原子的引入而具有良好的抗电、乳化、去污和防锈性能，并已广泛地应用于纺织、医药、洗涤剂、建材等行业。目前磷酸二乙酯残留的检测方法主要有气相色谱法、气质联用法、液相色谱法和液相色谱串联质谱法。应用气相色谱法和气质联用法检测磷酸二乙酯需要先进行衍生化反应，前处理步骤繁琐，而液相色谱串联质谱法则可直接对磷酸二乙酯进行测定，并具有定性特异性的优点。

检测方法

1、样品处理

青刀豆样品用搅拌机搅碎，称量供试品5g(准确至0.01g)置于50ml塑料离心管中。在离心管中加入5ml饱和氯化钠溶液，0.5ml浓盐酸，涡旋混匀后加入10ml乙酸乙酯/乙腈(1+1)提取剂。试样经匀浆机15000r/min匀浆提取1min后于3000r/min转速离心样品3min，吸取上清液到圆底烧瓶中。用10ml乙酸乙酯/乙腈(1+1)提取剂清洗匀浆机刀头，转入离心管中再提取样品1次，再经3000r/min转速离心后将上清液并入圆底烧瓶中，提取液于45℃水浴中真空旋转蒸至剩余约2ml。将浓缩液转移至已用乙腈活化的活性炭净化小柱，用10ml乙腈洗脱，收集洗脱液。收集的洗脱液经减压浓缩近干后，用流动相1.0ml溶解样品，过0.45μm滤膜后待上机。

2、色谱和质谱条件

色谱条件：色谱柱为ThermoScientific Waters SpherisorbRR column-NH22.1mmx150mm,5μm(美国,ThermoFisher)；流动相为 10mmol/L-乙酸铵水溶液+乙腈(55+45,pH值6.5)；柱温30℃；流速0.2ml/min；进样量10μl。

质谱条件：ESI负电离源，选择反应监测(SRM)扫描模式；喷雾电压3000V；毛细管温度350℃；蒸发温度100℃；壳气流量30psi，辅助气流量5psi；定量离子m/z153>125，定性离子m/z153>125,79。质谱经Tune Master软件自动优化后得到最优的的套管透镜补偿电压和碰撞能量参数用于测定磷酸二乙酯。

参考文献

[1]潘艳坤,莫建光,韦英亮,等. 高效液相色谱-串联质谱法测定青刀豆中毒死蜱代谢物磷酸二乙酯[J]. 广西科学,2012,19(4):348-351. DOI:10.3969/j.issn.1005-9164.2012.04.014.