HCC1954 人乳腺导管癌细胞系的应用

背景^[1-3]

HCC1954人乳腺导管癌细胞系是一种来源于人类乳腺导管癌的细胞系。这些细胞在实验室条件下可以进行培养和研究，以深入了解乳腺导管癌的生物学特性、发生机制以及潜在的治疗方法。

HCC1954人乳腺导管癌细胞系的研究对于理解乳腺导管癌的发病机理、预防和治疗策略的制定具有重要意义。通过对这些细胞的研究，科学家们可以探索乳腺导管癌细胞的生长、增殖、转移和耐药性等特性，以及寻找新的治疗靶点和药物。

在实验室中，HCC1954人乳腺导管癌细胞系通常通过细胞培养技术进行培养和繁殖。科学家们使用特定的培养基和条件，模拟体内的环境，以促进细胞的生长和增殖。通过这些细胞培养实验，可以观察细胞的形态、生长速度、对药物的敏感性等指标，以评估乳腺导管癌的生物学特性和治疗效果。

HCC1954人乳腺导管癌细胞系

HCC1954人乳腺导管癌细胞系细胞培养操作

1)复苏HCC1954人乳腺导管癌细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)HCC1954人乳腺导管癌细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)HCC1954人乳腺导管癌细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

HCC1954人乳腺导管癌细胞系可以用于SUFU调控HIPPO通路影响乳腺癌细胞生物学功能

通过探讨SUFU调控HIPPO通路的分子机制,阐明SUFU调控乳腺癌生长的作用机理,从而揭示了乳腺癌中HIPPO通路调控的新机制,为深入研究HIPPO通路在乳腺癌进展中的作用提供新的依据。

方法:1.分析TCGA公共数据库中乳腺癌患者基因表达谱,比较低表达SUFU和高表达SUFU的乳腺癌患者生存率间差异。

2. 慢病毒构建稳定敲低、稳定过表达SUFU的乳腺癌细胞株。包括:HCC1954人乳腺导管癌细胞系、MDA-MB-231、MCF-7、T47D、SK-BR-3,免疫印迹验证其敲低、过表达效率。

3. CCK-8检测乳腺癌细胞敲低、过表达SUFU后生长活力的变化。

4. 建立荷瘤小鼠模型:裸鼠皮下接种对照组及敲低SUFU组MDA-MB-231细胞,观察并记录肿瘤生长情况。H&E染色、免疫组化实验检测敲低SUFU对肿瘤生长及相关蛋白表达的影响。

5. 转录组测序技术对稳定敲低SUFU和对照组HCC1954人乳腺导管癌细胞系以及稳定过表达SUFU和对照组SK-BR-3细胞进行全基因组测序,分别比较两组的信号通路和基因表达差异,并采用免疫印迹实验加以验证。

6. 蛋白免疫印迹检测SUFU及HIPPO通路相关蛋白表达。

7. Luciferase荧光素酶报告基因实验检测SUFU对YAP转录活性影响。

8. 免疫荧光、核质分离实验检测SUFU对YAP出入核影响。

9. 免疫共沉淀检测SUFU与HIPPO通路关键组分蛋白的相互作用。

10. 免疫荧光检测SUFU与LATS1共定位。11.分子克隆实验构建SUFU野生型和区段缺失突变体质粒。

结果:1.SUFU与乳腺癌患者生存率相关分析根据TCGA公共数据库生物信息学结果显示,SUFU表达高低与乳腺癌患者生存率高低有关,SUFU低表达乳腺癌患者的生存率低于高表达的乳腺癌患者(p=0.0329),且在5年生存期时差异最显著。

2. 细胞模型构建通过对乳腺癌细胞中SUFU蛋白表达水平的检测,构建HCC1954人乳腺导管癌细胞系、MDA-MB-231、MCF-7、T47D敲低SUFU以及MDA-MB-231、HCC1954人乳腺导管癌细胞系、MCF-7、SK-BR-3过表达SUFU的乳腺癌细胞模型,免疫印迹验证细胞中SUFU敲低、过表达效率。

3. SUFU影响乳腺癌细胞的生长活力3.1过表达SUFU,抑制MDA-MB-231、HCC1954人乳腺导管癌细胞系、MCF-7、SK-BR-3细胞生长活力。3.2敲低SUFU,促进MDA-MB-231、HCC1954人乳腺导管癌细胞系、MCF-7细胞生长活力。

4. 体内实验检测SUFU对肿瘤生长影响裸鼠荷瘤模型显示:敲低SUFU显著促进肿瘤生长,经H&E染色、IHC检测,敲低SUFU显著上调Ki67表达。

结论:1.SUFU低表达乳腺癌患者的生存率低于高表达的乳腺癌患者。2.SUFU抑制乳腺癌细胞生长活力。3.SUFU抑制YAP出入核及靶基因的转录。

参考文献

[1]Hedgehog/GLI Signaling Pathway:Transduction,Regulation,and Implications for Disease[J].Sigafoos Ashley N.;Paradise Brooke D.;FernandezZapico Martin E..Cancers,2021

[2]SASH1 suppresses triple-negative breast cancer cell invasion through YAP-ARHGAP42-actin axis.[J].Jiang Ke;;Liu Peng;;Xu Huizhe;;Liang Dapeng;;Fang Kun;;Du Sha;;Cheng Wei;;Ye Leiguang;;Liu Tong;;Zhang Xiaohong;;Gong Peng;;Shao Shujuan;;Wang Yifei;;Meng Songshu.Oncogene,2020

[3]PGC-1αRegulates Cell Proliferation and Invasion via AKT/GSK-3β/β-catenin Pathway in Human Colorectal Cancer SW620 and SW480 Cells.[J].Yun Seong-Hoon;;Park Joo-In.Anticancer research,2020(2)

[4]Hippo Signaling in Embryogenesis and Development[J].Zhengming Wu;;Kun-Liang Guan.Trends in Biochemical Sciences,2020

[5]方堃.SUFU调控HIPPO通路影响乳腺癌细胞生物学功能[D].大连医科大学,2023.