"HCC1954:人乳腺导管癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
细胞生长:贴壁
冻存和复苏的原则:慢冻快融》当细胞冷到零度以下,可以产生以下变化:细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升GAO,并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻,可使细胞逐步脱水,细胞内不致产生大的冰晶;相反,结晶就大,大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。慢冻程序》1.标准程序:采用细胞冻存器》当温度在-25℃以上时,1~2℃/min;当温度达-25℃以下时,5~10℃/min;当温度达-100℃时,可迅速放入液氮中。2.简易程序:将冷冻管(管口要朝上)放入纱布袋内,纱布袋系以线绳,通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口,按每分钟温度下降1~2℃的速度,在40min内降至液氮表面过夜,次晨投人液氮中。3.传统程序:冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽长期储存。细胞冻存方法:1.预先配制冻存液》(1)8%DMSO+细胞生长液(92%血清)2.取对数生长期细胞,经胰酶消化后,加入适量冻存液,用吸管吹打制成细胞悬液(1×10(6)~5×10(6)细胞/ml)。3.加入1ml细胞于冻存管中,密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。液氮长期保存。保存细胞的复苏方法:1.快速解冻》冻存细胞从液氮中取出后,立即放入37℃水浴中,轻轻摇动冷冻管,使其在1分钟内全部融化(不要超过3分钟)。2.解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养,24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液,以去除DMSO。3.如果细胞对冷冻保护剂别敏感解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂,然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
CHP 212细胞类似产品::HCC-1806细胞、H-1155细胞、KMS-11细胞
KNS62细胞类似产品::LLC-MK-2细胞、AML12细胞、SKNEP-1细胞
FF-WT-BJ细胞类似产品::hTERT-HPNE细胞、R 2 C细胞、H-4细胞
JB6 clone 30, subclone 7b细胞类似产品::JB6 Cl 30细胞、RS4;11细胞、RC92A细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
细胞背景资料:详见相关文献介绍
HCC1954:人乳腺导管癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
细胞形态:上皮细胞样
B16/BL6细胞类似产品::ketr 3细胞、Huh-7.5细胞、RWPE2细胞
P3X63Ag8细胞类似产品::HEK293A细胞、SCC-7细胞、SNU407细胞
U266BL细胞类似产品::HP615细胞、RMG1细胞、NOZ细胞
细胞培养方面注意的几点:无菌意识要强:实验进行前,超净台以紫外灯照射30分钟灭菌,以70%ethanol擦拭无菌操作抬面,并开启超净工作台风扇运转数分钟后,才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置,其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以70%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域,一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45°角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基:不同的细胞可能培养基不同,甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞,有文献就选用neurobase培养基,而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的,而这种培养基中含有抗氧化剂成分,此时,我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:4℃冰箱全溶后再分装,在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到56℃后,将血清放入,待温度升GAO到56℃后计时,一般5分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须,一般不要作此热处理,因为会造成沉淀物之显著增多,且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。
细胞传代方法:1:4-1:8传代;每周换液2-3次。
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
HCC1954:人乳腺导管癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
细胞生长特性:偶尔上皮细胞空泡
细胞培养中常用设施及设备:实验室设计:细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁、空气清新,干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,而洗刷消毒在另一室。常用设施及设备:1)超净工作台:也称净化工作台,分为侧流式、直流式和外流式三大类。2)无菌操作间:一般由更衣间、缓冲间和操作间三部分组成。操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱、离心机、倒置显微镜等。缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及消毒HAO的无菌物品等。3)操作间:普通培养箱、离心机、水浴锅、定时钟、普通天平及日常分析处理物。4)洗刷消毒间:烤箱、消毒锅、蒸馏水处理器及酸缸等。5)分析室:显微镜、计算机及打印机等。
M3 Clone M-3细胞类似产品::HMy2.CIR细胞、HN-6细胞、T/G HA-VSMC细胞
C3H/10T1/2细胞类似产品::JIMT-1细胞、SF763细胞、RTMC细胞
KNS42细胞类似产品::MV4II细胞、HCC0095细胞、NCI-H526细胞
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MV(4;11)细胞类似产品::PC12(高分化)细胞、WISH细胞、451-LU细胞
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P1-Raji细胞类似产品::RCC-10RGB细胞、MG-HU-3细胞、OCI-AML-5细胞
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HCC1954:人乳腺导管癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
mouse Inner Medullary Collecting Duct-3细胞类似产品::MC/CAR细胞、HEM-L细胞、HuH6细胞
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Helacyton gartleri细胞类似产品::HCGC细胞、VP229细胞、RBL.2H3细胞
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3T3 J2细胞类似产品::Henrietta Lacks cells细胞、RPMI 8402细胞、G-401细胞
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HCC1954:人乳腺导管癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
OP9细胞类似产品::SNU354细胞、P3X63 Ag8细胞、HCC-1187细胞
IOSE 29细胞类似产品::293-EBNA1细胞、F442A细胞、Hx147细胞
NIH:OVCAR-8细胞类似产品::X63-Ag8.653细胞、QBI-HEK 293A细胞、IEC-6细胞
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SW 839细胞类似产品::EL 4细胞、TT细胞、FU-97细胞
NS1细胞类似产品::H-889细胞、OVCAR-5细胞、AN3细胞
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