碱性橙 2的应用及危害

碱性橙 2，英文名：Basic Orange 2，化学名为 4-苯基偶氮-1,3-苯二胺盐酸盐。其是一种偶氮类碱性染料，为致癌物，禁止作为食品添加剂使用，主要用于纺织品、皮革制品及木制品的染色。

应用

碱性橙 2是一种偶氮类碱性工业染料，俗名“王金黄”、“块黄”等。一般用于腈纶纤维的染色和织物的直接印花，也用于蚕丝，羊毛和棉纤维的染色，还用于皮革、纸张、羽毛、草、木、竹等制品的染色。

危害

过量摄取、吸入以及皮肤接触该物质均会造成急性和慢性的中毒伤害，为致癌物。根据我国的相关标准，该物质并未列入食品添加剂范围之内。

一种碱性橙Ⅱ人工抗原的合成

现有的仪器检测法很难实现对碱性橙Ⅱ的免疫检测，未见相关免疫检测方法的报道。为了弥补这一空白，设计了以对氨基苯丁酸及间苯二胺为原料，通过重氮化法制备人工半抗原，用碳二亚胺法合成碱性橙Ⅱ免疫检测的完全抗原。

一种碱性橙Ⅱ人工抗原的合成方法，其特征在于以对氨基苯丁酸及间苯二胺为原料，通过重氮化法制备人工半抗原，用碳二亚胺法将人工半抗原与载体蛋白牛血清白蛋白BSA偶联，用分光光度法测定偶联物的偶联比，制得碱性橙Ⅱ人工抗原，步骤为：

（1）人工半抗原的制备

A液：将50mg对氨基苯丁酸溶于2mL无水乙醇，调pH 1～2，加亚硝酸钠溶液，直到反应液取样使淀粉碘化钾试纸变蓝，继续反应1h；

B液：间苯二胺35mg溶于2mL无水乙醇，制得B液；

将A液逐滴加入B液中，反应过程保持pH 8～9，反应3h制得碱性橙Ⅱ-丁酸人工半抗原；

（2）人工抗原的制备

C液：碱性橙Ⅱ-丁酸人工半抗原8mg，6 mg 碳二亚胺，4mg N-N琥珀酰酐NHS溶于2 mL 0.01M 磷酸盐缓冲液PBS中，磁力搅拌3 h；

D液：20mg BSA溶于0.05M pH 9.6碳酸盐缓冲液中，4℃下保存待用；

冰浴条件下将C液逐滴加入D液中，然后置4℃下冰孵3h，制得碱性橙Ⅱ-丁酸-BSA偶联物混合液，即是碱性橙Ⅱ人工抗原混合液；

透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；

将碱性橙Ⅱ-丁酸-BSA偶联物混合液移入透析袋中，用每次2L的0.01M的PBS溶液透析2次，再用每次2L的去离子水透析2次，共透析3天；最后冷冻干燥透析袋中的液体制成粉末，制得到碱性橙Ⅱ-丁酸-BSA偶联物，即是碱性橙Ⅱ人工抗原；

（3）人工抗原的鉴定：碱性橙Ⅱ人工抗原采用分光光度法鉴定其偶联结果，利用标准蛋白得到标准曲线，计算其偶联比。

参考文献

CN102120765A