Co-IP试剂盒

背景^[1-7]

Co-IP试剂盒是基于抗体和抗原之间结合的专一性用于研究蛋白质相互作用的经典方法。其原理是细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在许多蛋白质与蛋白质之间的相互作用体被保留下来，利用目标蛋白质特异性抗体免疫沉淀，沉淀得到的蛋白质复合体能够通过变性凝胶电泳分离开来，以此定性或定量分析几种蛋白质间相互作用力大小。

免疫共沉淀Co-IP(Co-immunoprecipitation)技术是检测蛋白质间相互作用的经典方法，其以细胞内源性靶蛋白为诱饵，将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育，形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-proteinA/G小珠”复合物，然后将该复合物纯化后进行凝胶电泳分离蛋白，应用Western blot或者质谱技术鉴定靶蛋白的结合蛋白。免疫共沉淀的优势在于该体系是在生理条件下检测蛋白质之间的相互作用。

免疫共沉淀是当细胞在非变性条件下被裂解时，细胞内存在的蛋白质－蛋白质之间的相互作用能够得以保留。因此，用目的蛋白的抗体进行免疫沉淀时，在体内能够与目的蛋白结合的其它蛋白质也能被沉淀下来。免疫共沉淀主要用于寻找新的相互作用蛋白，同时也是验证两种蛋白质之间具有相互作用的经典方法。

实验步骤：

1、温和条件下进行蛋白抽提，BCA定量，调整蛋白浓度

2、样品预处理：用Protein A/G Sepharose孵育

3、样品与IP抗体进行孵育

4、洗涤Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex，并对免疫复合物进行变性处理

5、沉淀产物SDS—PAGE或者WB鉴定（目前暂无其它鉴定）

6、Western blot检测

产品优势：

1.Co-IP Kit里的交联剂，可让抗体与琼脂糖珠交联，洗脱时只收集诱饵蛋白2.同一个抗体既可用于免疫沉淀，又可用于WB检测；

3.免除WB中抗体轻重链的信号干扰；

4.操作简单、耗时短、结果客观准确；

应用^[8]

Co-IP试剂盒可用于检测蛋白相互作用：

例如在免疫共沉淀与质谱联用检测TRIM3相互作用蛋白的要研究中先通过Co-IP与LC-MS联用检测TRIM3的相互作用蛋白,后对检测的结果分析、筛选,再通过分子生物学实验进一步验证质谱检测结果,且在宫颈癌和乳腺癌细胞中探究TRIM3的功能,与质谱结果对照。该实验是先进行免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,co-IP)后进行质谱(mass spectrometry,MS),这种方法可以确保从生理条件下的细胞或组织中分离、鉴定靶蛋白和其相互作用蛋白。

参考文献

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[8]孙静静.免疫共沉淀与质谱联用检测TRIM3相互作用蛋白[D].大连理工大学,2017.