品名：Smart-CoIP™ CoIP Kit，货号：IF9058，品牌：Engibody
订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)
NIH、麻省理工、哈佛、斯坦福等世界名校课题组青睐并长期采购的RIP试剂盒！
Smart-CoIP™ 试剂盒的五个巨大优势
1、本试剂盒适用于贴壁细胞、悬浮细胞、动物组织及植物组织，均有针对性的详细步骤可以处理这些样本类型，是个真正的多合一Kit。
2、本试剂盒适用于胞浆蛋白互作PPI、膜蛋白互作PPI、核质蛋白互作PPI及染色质蛋白互作PPI的研究。
3、本试剂盒还适用于Flag/GFP等标签融合蛋白互作PPI及内源蛋白互作PPI的研究。
4、本试剂盒完美衔接四大CoIP下游实验（Western Blotting、MS质谱、酶活性测定及蛋白结构解析）。
5、本说明书是一本CoIP实验的全面技术手册，透彻分析了CoIP实验中的重点、难点，对各种重点难点问题都有针对性的解决方案。同时包含了蛋白互作研究的基础知识和经典数据库信息，有了这本保姆级使用手册，所有疑难都会迎刃而解，CoIP尽在掌握之中。
保姆级Co-IP试剂盒
一盒在手，Co-IP无忧！
第一部分：背景简介及应用场景
蛋白Co-IP实验（免疫共沉淀，Co-Immunoprecipitation）是经典的利用特异性抗体从样品中捕获靶蛋白（诱饵蛋白）及其互作蛋白（猎物蛋白）复合物的一项技术，能够特异性富集所研究的互作蛋白PPI复合物。由于实验过程中保持了蛋白的非变性状态，保留了互作蛋白复合物的细胞内天然构象。相对于酵母双杂交、GST Pull-down等方法，其显著优势便是保存了互作蛋白复合物在目的组织/细胞内的“体内天然”状态。
可以在下游衔接Western Blot、MS质谱、酶活性测定及蛋白结构解析等实验。其中Western Blot用于验证已知的互作蛋白，MS质谱用于筛选发现未知的互作蛋白。
1、CoIP和GST Pull-down，这两种最经典蛋白-蛋白互作技术的内在关系是什么？
CoIP———蛋白免疫共沉淀，In Vivo体内研究蛋白互作PPI的经典方法，保留在靶标细胞/组织内的天然构象蛋白互作的真实情况，可以用于验证已知蛋白也可以用于筛选发现未知蛋白。
GST Pull-down———GST 标签融合蛋白与猎物蛋白pull-down，In Vitro体外研究蛋白互作PPI的经典方法。将目的蛋白序列加上GST或His标签序列进行基因合成并构建重组质粒，转化大肠杆菌后表达纯化蛋白，再将GST 标签融合蛋白固定于GSH磁珠上作为诱饵蛋白，然后去拉取与之结合的猎物蛋白。
注意：在下列两种情况下GST Pull-down是不可替代和不可或缺的：
a. 诱饵蛋白找不到CoIP级的抗体，而GST Pull-down不需要CoIP级的免疫捕获抗体，正好克服了这个难题。
b. 目的蛋白所在的研究对象（比如真菌等）无法采用普通的标签质粒转染、转化的方法进行外源标签融合蛋白的过表达，也找不到内源蛋白的抗体，这时便无法实施CoIP实验，因此GST Pull-down就是这类情况下研究蛋白互作的唯一选择。
2、CoIP和Transient CoIP (PL邻近标记技术)、In Cell CoIP (FRET技术)，这三种蛋白-蛋白互作技术之间的比较
a. Transient CoIP (PL邻近标记技术)主要优势是适用于瞬时作用的、脆弱的蛋白互作，通过对细胞内的蛋白在原位进行生物素标记，使用链霉亲和素beads捕获标记后蛋白。这样真正反映了In Vivo体内蛋白互作，且具有空间蛋白互作组学的功能。
b. In Cell CoIP (FRET技术)使用细胞内实时荧光监控技术，可以通过荧光显微镜实时观察蛋白在Live Cell活细胞内的实时互作动态。
c. 这两种技术都有自己的独特优势，是经典CoIP技术的有益补充。
第二部分：技术原理和技术流程
技术原理：
当细胞/组织在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X（诱饵蛋白）的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y（猎物蛋白）也能被捕获共同沉淀下来。
在细胞/组织裂解物中，特异性一抗结合诱饵蛋白，Protein A/G beads捕获一抗-目的蛋白复合物，这个复合物也包含了互作蛋白（一个或者多个）。洗涤掉非特异性结合的蛋白后，再用洗脱液将互作蛋白复合物从Beads上洗脱下来，从而得到免疫共沉淀的产物，产物既可用Western Blot来检测已知蛋白，也可用MS质谱来鉴定未知蛋白。
技术流程：
根据研究的目的蛋白不同，采用2种不同的技术路线
1、对于内源蛋白的CoIP，可以直接选购能捕获目的蛋白的IP级抗体进行CoIP实验。
2、对于买不到合适抗体的内源蛋白，可以转染带有Flag/GFP等标签融合目的蛋白的质粒，在靶细胞内瞬时表达，然后采用Flag/GFP的IP级抗体来实施CoIP。
第五部分：试剂盒组分清单
（共计12个组分，均可单独购买）
| 编号 | 组分名称 | 数量 | 保存 | 注意事项 |
| 下列组分收到后需储存在 4 °C中，磁珠千万不要冷冻。 |
| IF0002 | Protein A/G Magnetic Beads for IP/CoIP/ChIP
备注：Protein A/G磁珠表面已预包被BSA, 可以最大程度降低非特异性结合。1mL磁珠悬液可以捕获大于600 µg的抗体 (rabbit IgG or mouse IgG) | 1 mL | +4 °C | 不能冷冻磁珠
不能干燥磁珠
不能高速离心磁珠 |
| IF6603 | Lysis Buffer for Co-IP | 24 mL | +4 °C | 用于胞浆蛋白互作 |
| COIP001 | Nuclear Lysis Buffer for Co-IP | 24 mL | +4 °C | 用于核蛋白互作 |
| IF9212 | Wash Buffer for Co-IP | 120 mL | +4 °C |
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| COIP002 | Elution Buffer for WB and MS | 2 mL | +4 °C | 变性洗脱液，用于WB及MS |
| IF9213 | Elution Buffer for non-denaturing | 4 mL | +4 °C | 非变性洗脱液 |
| IF9216 | Neutralization Buffer for non-denaturing | 0.5 mL | +4 °C | 非变性中和液 |
| 下列组分收到后需储存在室温中 |
| IF9217 | QuickStain™ One-Step Protein Gel (PAGE) Blue Stain
蛋白PAGE胶快速染色液（用于MS质谱） | 50mL | 室温 | 超快染色蛋白胶，灵敏度极高，10分钟即可让低至10ng的蛋白显示条带，用于质谱切割胶条 |
| 下列组分收到后必须要储存在 -20 °C中 |
| IF6740 | 5×Sample Loading Buffer (Reducing and Denaturing) | 1 mL | -20 °C | 采用新型还原剂，不含DTT，无臭味 |
| AT1596 | Normal Mouse IgG抗体阴性对照 | 100 µL | -20 °C | 与靶蛋白抗体用量相等 |
| AT1597 | Normal Rabbit IgG抗体阴性对照 | 100 µL | -20 °C | 与靶蛋白抗体用量相等 |
| COIP003 | DNase I套装（含有10×DNase I Buffer） | 100 U | -20 °C | 用于染色质蛋白互作研究 |
Smart-CoIP™ CoIP Kit 保姆级CoIP 试剂盒官网详细页面：
https://www.engibody.com/products/IF9058-Magnetic-Co-Immunoprecipitation-Co-IP-Kit.html
注意：本试剂盒仅用于科学研究，不用于临床诊断。
订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)
