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免疫共沉淀IP/COIP

询价 500 ul 起订

北京更新日期：2024-04-11

北京嘉美臻元生物技术有限公司

非会员

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邮箱：lab-manager@jiamay.com

产品详情:

中文名称：: 免疫共沉淀IP/COIP

产品类别：: 技术服务免疫生化实验

一、免疫共沉淀实验技术原理
免疫共沉淀（Co-IP）是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“prorein A"特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。

嘉美实验免疫共沉淀实验原理示意图

二、实验操作流程

1、样品准备

1）取细胞加入500μl上样Buffer(无溴酚蓝)和50ul 10mg/ml PMSF，混匀，超声波破碎细胞

2）4℃，12000rpm离心10min

3）取上清夜，-70℃冻存24hr

4）4℃ 12000rpm再次离心10min，取上清分装，一份用于定蛋白，另一份加入溴酚蓝(0.1%(W/V))后于100℃加热4min，后于-20℃保存待用。

2、定量蛋白及计算电泳上样量：根据总蛋白测定试剂盒说明书操作测定样本中的总蛋白含量，电泳上样量定为40ug

3、免疫沉淀

1）准备A蛋白-Sepharose珠：用PBS 洗两遍珠子，然后用PBS配制成50%浓度，建议减掉枪尖部分，避免在涉及琼脂糖珠的操作中破坏琼脂糖珠

2）准备A蛋白-Sepharose珠.一抗复合物：按每50 μl A蛋白-Sepharose珠中加入10ul 一抗，4℃孵育1 h，8000rpm离心5 min，PBS洗涤3次，加50ulPBS

3）取100 μg总蛋白，加入50ul A蛋白-Sepharose珠.一抗复合物，4℃轻摇2h，PBS洗涤3次，之后加入50ul 1×SDS凝胶上样缓冲液，100℃变性3 min，以游离抗原、抗体、珠子，8000 rpm室温离心5 min，蛋白上清储于-20℃备用。

4、电泳

1）安装好电泳装置

2）根据不同的指标配制相应浓度的分离胶，灌胶约3/5体积，液封 (<10%用0.1%SDS,>10%用异丙醇)

3）30min后，待凝后倾去封液

4）配5%的浓缩胶，灌胶至距平板顶部2mm处，插入梳子, 30min后，待凝后拔出梳子，用去离子水清洗加样孔，用滤纸吸干

5）上样：各样品取50ug上样，marker取10μl上样(上样前需按说明书进行预处理)

6）缓慢加入内、外槽缓冲液，接通电源，90v电泳至指示剂进入分离胶后，调电压至150V继续电泳

7）当指示剂距平板底端1cm处时停止电泳

5、转膜及检测

1）准备2个Φ12cm的平面皿，一个装去离子水浸泡NC膜 20min，另一装转移缓冲液浸泡海绵和滤纸20min

2）取下胶，切除浓缩胶部分后，将分离胶浸入转移缓冲液中约 5min

3）按顺序安装好转膜装置（黑色板-海绵-三层滤纸-凝胶-硝酸纤维膜-三层滤纸-海绵-红色板）

4）完全排除气泡， 4℃，100mA转膜2hr。

5）倾去转膜缓冲液，拆除转膜装置，将硝酸纤维膜放入丽春红中摇床染色15min，用去离子水清洗至能看到条带，后用铅笔标出marker位置，再用去离子水震荡以去除浮色。在右上角剪去一角以辨上下左右

6）将膜转移至另一容器中，用5%脱脂奶粉封闭, 4℃过夜

7）将膜转移至尽可能小的容器中并加入稀释好的一抗

8）37℃摇床孵育约2hr

9）PBST洗涤4次，每次5min

10）将膜转移至尽可能小的容器中并加入稀释好的二抗，37℃摇床孵育约30min

11）PBST洗涤4次，每次5min

12）将膜转移至尽可能小的容器中并加入预先配制好的化学发光底物（A液与B液等体积混和），室温孵育5min后

13）取出NC膜，去尽残液，包好，放入X-光片夹中显影

14）扫描及分析

嘉美实验免疫共沉淀实验服务流程图

三、标本保存及运输

1、提供的样品及量要求：新鲜或正确保存的组织、细胞或蛋白样品，组织样品：动物组织＞400mg/样品，植物组织＞2g/样品；细胞样品：＞2×107 细胞数/样品；蛋白样品：裂解样品总蛋白量＞2ml/样品。

2、提供目的蛋白和互作蛋白的详细信息，包括蛋白种属、大小、参考文献等。

3、嘉美实验建议客户提供目的蛋白阳性对照。

4、嘉美实验提供免疫共沉淀所需一抗。
5、如果客户提供，需要保证所需提供符合免疫共沉淀技术要求的浓缩或即用型抗体；若因客户抗体原因导致实验失败，由此造成的损失由客户承担。

6、标本干冰寄送，并应避免各类污染和反复冻融。

免疫共沉淀_IP_COIP_

北京嘉美臻元生物技术有限公司（嘉美实验）是一家专注于生命科学领域的高科技企业，公司创立于2005年，由在国内科研试剂、实验技术、质量管理领域有着十几年从业经验的专业、专家团队组建而成；2009年在北京重组，先后成立了北京嘉美诺斯生物科技有限公司（主要开展生物相关产品进、出口业务），北京嘉美纽诺生物科技有限公司（主要为大型药厂、诊断试剂公司提供服务）。为方便实验服务项目开展，成立了北京嘉美臻元生物技术有限公司，以“嘉美实验”品牌提供实验外包服务。近五年来，公司已为全国各类科研用户提供了近5000个大大小小的专项实验外包或整体课题外包项目服务，实验项目涵盖了生命科学、医学的各研究领域。经过多年努力，公司已成为

成立日期	(9年)
注册资本	100.000000万人民币
员工人数	50-100人
年营业额	￥ 100万-300万
经营模式	服务
主营行业	生化试剂,细胞培养,微生物学,细胞生物学,免疫安全