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免疫共沉淀IP/COIP

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基本信息:

  • 发布时间: 2019-03-14
  • 产品名称: 免疫共沉淀IP/COIP
  • 产品英文名称: 
  • CAS号: 
  • 产品包装: 500 ul
  • 产品价格:  ul
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  • 产品类别: 技术服务 免疫生化实验

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免疫共沉淀IP/COIP

产品描述:

一、免疫共沉淀实验技术原理
免疫共沉淀(Co-IP)是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“prorein A"特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。

嘉美实验免疫共沉淀实验原理示意图
二、实验操作流程
1、样品准备
  1)取细胞加入500μl上样Buffer(无溴酚蓝)和50ul 10mg/ml PMSF,混匀,超声波破碎细胞
  2)4℃,12000rpm离心10min
  3)取上清夜,-70℃冻存24hr
  4)4℃ 12000rpm再次离心10min,取上清分装,一份用于定蛋白,另一份加入溴酚蓝(0.1%(W/V))后于100℃加热4min,后于-20℃保存待用。

2、定量蛋白及计算电泳上样量:根据总蛋白测定试剂盒说明书操作测定样本中的总蛋白含量,电泳上样量定为40ug
 
3、免疫沉淀
  1)准备A蛋白-Sepharose珠:用PBS 洗两遍珠子,然后用PBS配制成50%浓度,建议减掉枪尖部分,避免在涉及琼脂糖珠的操作中破坏琼脂糖珠
  2)准备A蛋白-Sepharose珠.一抗复合物:按每50 μl A蛋白-Sepharose珠中加入10ul 一抗,4℃孵育1 h,8000rpm离心5 min,PBS洗涤3次,加50ulPBS
  3)取100 μg总蛋白,加入50ul A蛋白-Sepharose珠.一抗复合物,4℃轻摇2h,PBS洗涤3次,之后加入50ul 1×SDS凝胶上样缓冲液,100℃变性3 min,以游离抗原、抗体、珠子,8000 rpm室温离心5 min,蛋白上清储于-20℃备用。
 
4、电泳
  1)安装好电泳装置
  2)根据不同的指标配制相应浓度的分离胶,灌胶约3/5体积,液封 (<10%用0.1%SDS,>10%用异丙醇)
  3)30min后,待凝后倾去封液
  4)配5%的浓缩胶,灌胶至距平板顶部2mm处,插入梳子, 30min后,待凝后拔出梳子,用去离子水清洗加样孔,用滤纸吸干
  5)上样:各样品取50ug上样,marker取10μl上样(上样前需按说明书进行预处理)
  6)缓慢加入内、外槽缓冲液,接通电源,90v电泳至指示剂进入分离胶后,调电压至150V继续电泳
  7)当指示剂距平板底端1cm处时停止电泳
 
5、转膜及检测
  1)准备2个Φ12cm的平面皿,一个装去离子水浸泡NC膜 20min,另一装转移缓冲液浸泡海绵和滤纸20min
  2)取下胶,切除浓缩胶部分后,将分离胶浸入转移缓冲液中约 5min
  3)按顺序安装好转膜装置(黑色板-海绵-三层滤纸-凝胶-硝酸纤维膜-三层滤纸-海绵-红色板)
  4)完全排除气泡, 4℃,100mA转膜2hr。
  5)倾去转膜缓冲液,拆除转膜装置,将硝酸纤维膜放入丽春红中摇床染色15min,用去离子水清洗至能看到条带,后用铅笔标出marker位置,再用去离子水震荡以去除浮色。在右上角剪去一角以辨上下左右
  6)将膜转移至另一容器中,用5%脱脂奶粉封闭, 4℃过夜
  7)将膜转移至尽可能小的容器中并加入稀释好的一抗
  8)37℃摇床孵育约2hr
  9)PBST洗涤4次,每次5min
  10)将膜转移至尽可能小的容器中并加入稀释好的二抗,37℃摇床孵育约30min
  11)PBST洗涤4次,每次5min
  12)将膜转移至尽可能小的容器中并加入预先配制好的化学发光底物(A液与B液等体积混和),室温孵育5min后
  13)取出NC膜,去尽残液,包好,放入X-光片夹中显影
  14)扫描及分析

嘉美实验免疫共沉淀实验服务流程图
 
三、标本保存及运输
1、提供的样品及量要求:新鲜或正确保存的组织、细胞或蛋白样品,组织样品:动物组织>400mg/样品,植物组织>2g/样品;细胞样品:>2×107 细胞数/样品;蛋白样品:裂解样品总蛋白量>2ml/样品。
2、提供目的蛋白和互作蛋白的详细信息,包括蛋白种属、大小、参考文献等。
3、嘉美实验建议客户提供目的蛋白阳性对照。
4、嘉美实验提供免疫共沉淀所需一抗。
5、如果客户提供,需要保证所需提供符合免疫共沉淀技术要求的浓缩或即用型抗体;若因客户抗体原因导致实验失败,由此造成的损失由客户承担。
6、标本干冰寄送,并应避免各类污染和反复冻融。
免疫共沉淀_IP_COIP_
  • 供应商联系方式:
  • 联系人 嘉美臻元
  • 公司名称 北京嘉美臻元生物技术有限公司
  • 电话 400-000-7401
  • 手机 400-000-7401
  • 传真 
  • 邮箱 lab-manager@jiamay.com
  • 地址  北京市昌平区中东路5号院4号楼1809
  • 公司简介:
  • 北京嘉美臻元生物技术有限公司(嘉美实验)是一家专注于生命科学领域的高科技企业,公司创立于2005年,由在国内科研试剂、实验技术、质量管理领域有着十几年从业经验的专业、专家团队组建而成;2009年在北京重组,先后成立了北京嘉美诺斯生物科技有限公司(主要开展生物相关产品进、出口业务),北京嘉美纽诺生物科技有限公司(主要为大型药厂、诊断试剂公司提供服务)。为方便实验服务项目开展,成立了北京嘉美臻元生物技术有限公司,以“嘉美实验”品牌提供实验外包服务。近五年来,公司已为全国各类科研用户提供了近5000个大大小小的专项实验外包或整体课题外包项目服务,实验项目涵盖了生命科学、医学的各研究领域。经过多年努力,公司已成为
免疫共沉淀IP/COIP生产厂家及价格:
  • 产品名称免疫共沉淀IP/COIP
  • 价格 ul
  • 供应商名称北京嘉美臻元生物技术有限公司
  • 发布时间2019-03-14