SNU-475人肝癌贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

SNU-475人肝癌贴壁细胞系是一种人肝癌贴壁细胞系，由韩国汉城国立大学医院（Seoul National University Hospital）建立。该细胞系是通过手术切除的肝癌组织进行传代培养而建立的，因此具有贴壁生长的特性。

SNU-475细胞系被广泛应用于肝癌研究，包括肝癌的发生、发展、治疗和药物筛选等方面的研究。该细胞系具有较高的异质性，可以作为肝癌研究的模型之一。

SNU-475人肝癌贴壁细胞系

SNU-475人肝癌贴壁细胞系细胞培养操作

1)复苏SNU-475人肝癌贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)SNU-475人肝癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)SNU-475人肝癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

SNU-475人肝癌贴壁细胞系可以用于姜黄素对人肝癌细胞SNU475增殖及凋亡的影响

探讨姜黄素对SNU-475人肝癌贴壁细胞系增殖及凋亡的影响机制。

方法:MTT法测定姜黄素对SNU-475人肝癌贴壁细胞系细胞的增殖抑制率,进一步的利用Western blot法检测相关蛋白的表达,并利用荧光染色法检测姜黄素存在下,SNU-475人肝癌贴壁细胞系细胞形态的变化,最后对肝癌细胞凋亡蛋白Caspase 3活性进行了探讨。

结果:姜黄素(0.51.5μmol/L)能够诱导了SNU-475人肝癌贴壁细胞系细胞的凋亡,且存在时间和剂量依赖性;Western blot法检测相关蛋白的表达结果表明,姜黄素(0.5、1.0μmol/L)能够诱导SNU-475人肝癌贴壁细胞系细胞中Akt、Bcl-2、组蛋白H3、H4和Cyclin D1的表达下降,有显著性差别,p21WAF1/CIP1蛋白表达水平显著上调;荧光染色法检测结果显示,在姜黄素(1.0μmol/L)药物作用后24h、48h、72h,人肝癌贴壁细胞系细胞的形态均可见明显改变;Caspase 3活性检测结果表明,姜黄素(0.5、1.0μmol/L)能显著提高SNU-475人肝癌贴壁细胞系细胞中凋亡蛋白Caspase 3活性。

结论:姜黄素作为组蛋白去乙酰化酶抑制剂能够诱导人肝癌贴壁细胞系细胞的凋亡,并对相关蛋白的表达和Caspase 3活性造成影响,最终对SNU-475人肝癌贴壁细胞系细胞的凋亡起到重要作用。

参考文献

[1]Molecular targets of dietary agents for prevention and therapy of cancer.Bharat B.Aggarwal;;Shishir Shishodia.Biochemical Pharmacology,2006

[2]Single Cell FRET Imaging for Determination of Pathway of Tumor Cell Apoptosis Induced by Photofrin-PDT.Yunxia Wu;;Da Xing;;Wei R.Chen.Cell Cycle,2006

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[4]Curcumin,a major component of food spice turmeric(Curcuma longa)inhibits aggregation and alters eicosanoid metabolism in human blood platelets.K.C.Srivastava;;A.Bordia;;S.K.Verma.Prostaglandins,Leukotrienes and Essential Fatty Acids(PLEFA),1995

[5]王文廉,姬颖华,万立新等.姜黄素对人肝癌细胞SNU475增殖及凋亡的影响[J].中药药理与临床,2015,31(04):47-50.