猫嗜衣原体PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

猫嗜衣原体PCR试剂盒是一种用于检测猫体内是否感染了猫嗜衣原体的PCR(聚合酶链式反应)试剂盒。猫嗜衣原体是一种常见的猫病原体，可以引起猫的呼吸道感染、眼结膜炎、发热等症状。

猫嗜衣原体PCR试剂盒的主要成分包括PCR反应液、DNA模板、引物、酶等。其中，PCR反应液是PCR反应的基础，包含PCR反应所需的各种成分，如缓冲液、离子、酶等。DNA模板是含有猫嗜衣原体特异性基因序列的DNA片段，用于扩增出特异性片段。引物是一段与DNA模板特异性结合的短序列，用于启动PCR反应。酶是热稳定的DNA聚合酶，用于催化DNA合成。

猫嗜衣原体

使用猫嗜衣原体PCR试剂盒时，需要将DNA模板、引物和PCR反应液混合后进行PCR反应。在适宜的温度和条件下，引物与DNA模板特异性结合，并通过酶的催化进行DNA合成，最终得到大量的特异性DNA片段。通过凝胶电泳等技术对这些片段进行检测和分析，可以确定是否存在猫嗜衣原体。

猫嗜衣原体PCR试剂盒具有高灵敏度、高特异性和高可靠性等特点，适用于对感染疾病的诊断，如猫嗜衣原体感染。同时，它也可以用于研究猫嗜衣原体的基因组结构和功能，为进一步了解该病原体的生物学特性和流行病学特征提供帮助。

应用^[4-5]

猫嗜衣原体PCR试剂盒可以用于动物衣原体分子检测方法研究和诊断试剂盒的研制及应用

基于衣原体的主要外膜蛋白基因（ompA）开发针对猪衣原体（C.suis)、流产嗜衣原体（Ch.abortus)及肺炎嗜衣原体(Cpn)的多重套式PCR（nested multiplexpolymerase chain reaction assay，nmPCR)检测方法及试剂盒，衣原体荧光定量PCR检测方法和LAMP检测方法。并应用nmPCR试剂盒对青海某羊场和重庆地区种猪场进行了衣原体病的流行病学研究。

获得以下研究结果：(1)本文建立了衣原体科特异PCR检测方法以及流产嗜衣原体、猪衣原体和肺炎嗜衣原体的单管同步分型的多重套式PCR（nmPCR）检测方法。在nmPCR首轮扩增中，可以扩增出衣原体科特异性的1100bp核酸片段。在此基础上，第二轮nmPCR扩增获得种特异性扩增片段：流产嗜衣原体340bp，猪衣原体526bp和肺炎嗜衣原体267bp。该方法具有灵敏度高和特异性的特点，与改良DNA提取方法相结合，可以有效实现对细胞培养物、猪、绵羊和山羊鼻咽拭子、粪拭子及组织样品中三种衣原体同时进行检测。

（2）本文研发了与猪衣原体、流产嗜衣原体及肺炎嗜衣原体的单管同步分型的多重套式PCR检测方法相匹配的标准化检测试剂。通过稳定性试验和实验室间验证试验，证明了该检测试剂盒具有良好稳定性和可重复性。

（3）本研究建立了衣原体的实时定量PCR检测方法，灵敏度高，特异性强。最低可以检测200拷贝/μL质粒DNA，可用于衣原体的诊断和流行病学调查。

（4）本文基于ompA基因，建立了衣原体科LAMP检测方法。该方法具有特异性强、灵敏度高及实验条件要求较低的特点，可以在水浴锅中完成，在添加了钙黄绿素后，阳性的LAMP扩增反应呈现明显的黄绿色，使检测结果的非常直观，容易判读。本法适宜于临床上对衣原体病进行现场快速筛查，但阳性样品可用其他方法进行分型确证。

（5）应用本文研发的猪衣原体、流产嗜衣原体及肺炎嗜衣原体的单管同步分型的多重套式PCR检测试剂盒对青海羊场和重庆猪场采集的样品进行检测。首次从猪检测到C.suis和Cpn，首次从我国绵羊和山羊检出C.suis和Cpn，并发现C.suis、Cpn和Ch.abortus对绵羊和山羊的混合感染。

参考文献

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[5]李应国.动物衣原体分子检测方法研究和诊断试剂盒的研制及应用[D].重庆大学,2013.