对酵母无机焦磷酸酶的介绍

概述^[1]

无机焦磷酸酶（PPA）基因是植物糖代谢过程中的蔗糖合成调控基因，为将该基因运用于甘蔗转基因的研究，从面包酵母克隆了该基因。无机焦磷酸酶（酵母）纯化自重组 E. coli 菌株，携带有从酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）克隆的 ppa 基因和蟾分枝杆菌（Mycobacterium xenopi）GyrA 内含肽的融合基因。该焦磷酸酶催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐：P207-4 + H20 →2HP04-2。在核酸扩增实验中，其可解除生成的无机焦磷酸盐对反应体系的抑制。由 Biohelix 公司（现在是 Quidel 公司的全资子公司）研发。无机焦磷酸酶（英语：Inorganic Pyrophosphatase，简称为焦磷酸酶）是一种催化一分子焦磷酸盐转化为两分子磷酸盐离子的酶。这是一个高放能的反应，因此此反应可偶联到一些热力学上不利的转化，以便驱动这些转化进行到完全。此酶的功能乃是在脂代谢（包括脂合成与分解）、钙吸收以及骨形成和DNA合成中扮演重要角色，其他生物化学转化也是如此。

组分

应用

反转录反应中提高 RNA 产量。

增强 DNA 复制。

活性定义

1 单位指标准反应条件下（20mM Tris-HCl，pH 7.5，2mM MgCl2，2mM PPi，25℃ 反应 10 分钟）每分钟催化无机焦磷酸盐生成1μmol 磷酸盐所需的酶量。

储存

-20℃可保存3年。

使用注意事项

（1）    该酶在多种反应Buffer中均具有活性，通常该酶在HDA扩增、LAMP扩增等实验中，可直接接入即可。

（2）    该酶的用量在不同的实验中需要优化，通常在0.05~1U/ml浓度调整。

（3）    该酶的反应温度为25℃，其在16~37℃均有活性，65℃ 10min可使该酶失活。

主要参考文献

[1] 范海阔, 黄东杰, 刘巧泉, 等. 无机焦磷酸化酶融合基因克隆分析及表达载体的构建[J]. 西南農業學報, 2007, 20(6): 1267-1271.