Kex 2蛋白酶的应用及产品优势

概述^[1]

蛋白酶是催化蛋白质水解的一类酶，是酶学研究中较早也是最深入的一种酶。到本世纪初，已经报导的微生物蛋白酶估计超过900种， 生物体的生理活动和疾病的发生，如食物之消化吸收、血液之凝固、溶血作用、炎症、血压调节、细胞分化自溶，机体衰老、癌症转移、生理活性肽的活化等，莫不与蛋白酶有关。

应用^[1]

Kex2蛋白酶是钙离子依赖性蛋白水解酶，能特异性识别和切割Arg-Arg、Lys-Arg等双碱基氨基酸羧基端肽键，与胰蛋白酶不同，Kex2不能识别和切割单一碱性氨基酸即精氨酸或赖氨酸的羧基端肽键。在酵母体内Kex2蛋白酶负责加工killer toxin和α-factor的前体。Kex2蛋白酶活性不受常规的丝氨酸蛋白酶抑制剂如抑肽酶、PMSF、TPCK所抑制。雅心重组Kex2蛋白酶是由毕赤酵母表达生产，与天然的酿酒酵母Kex2酶具有相同的酶特异性。最适作用pH为pH9.0，稳定储存的pH为pH5.0-6.0。

产品特性^[1]

来源               毕赤酵母表达

性状               白色，类白色粉末

比活               ≥10.0 units/mg pro.

纯度（蛋白电泳）   单一主条带

分子量（蛋白电泳） 67.0 ± 6.7 kDa

酶活单位：在25℃，50mM Tris-HCl，2mM CaCl2，pH8.0的3ml反应体系中，每分钟催化底物Boc-QRR-pNA释放出1μmol对硝基苯胺（4-nitroaniline）的酶量定义为一个酶活单位（Unit）。

推荐使用方法^[1]

推荐反应缓冲液：pH 7.0-9.0，50mM Tris-HCl，2mM Ca²⁺ 或者HEPES，5mM Ca²⁺。若溶解后不马上使用，建议使用20mM (pH 5.2) NaAc-HAc，2mM Ca²⁺ 缓冲液溶解冻干粉，溶解后酶的终浓度约为1-10mg/ml，按照需要分装后储存-20℃以下储存。反应时，用pH 7.0-9.0，50mM Tris-HCl，2mM Ca²⁺ 或HEPES，5mM Ca²⁺作为反应稀释液。

注：酶的最适反应pH为pH9.0，稳定pH为5.0-6.0。

储存和运输稳定性

（1）冻干粉储存稳定性：2-8℃，避光，防潮保存。

溶解保存缓冲液（20mM NaAc-HAc，pH 5.2，2mM Ca²⁺），溶解后存于-20℃以下，6个月稳定。反复冻融5次，无活性损失。

（2）运输稳定性：蓝冰保温运输，活性稳定。

产品优势^[1]

（1）无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料。

（2）质量稳定：批量生产，可保证稳定连续的批次生产；产品批次间无差异，质量稳定。

（3）纯度高：比活高；宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。

（4）冻干粉：易于储存和运输。

（5）符合法规要求：生产设备和生产环境符合相关法规要求，生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2015质量体系并符合GMP指导原则。

（6）质量文件完整：按客户需求，可提供相关法规支持文件。

主要参考资料

[1] 胡学智, & 王俊. (2008). 蛋白酶生产和应用的进展 (Doctoral dissertation).