RF/6A 猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞系的应用

背景^[1-3]

RF6A猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞系取自64日孕期胎猴脉络膜-视网膜，细胞表达因子VIII、纤维连接蛋白基因。RF/6A细胞在早期自发转化并已传代540次以上，电镜下观察到Weibel-Palade颗粒。高代次的RF/6A细胞用作滋养层以增强贴壁、转接能力和供养眼色素层黑素细胞。EXPASY细胞库显示，细胞属性可能被误认，虽然最初被认为是一种内皮细胞系，但已证明缺乏这种细胞类型的功能和转录组学特征。

RF6A猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞系

RF6A猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞系细胞处理：

冻存RF6A猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞系细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

RF6A猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁RF6A猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞系细胞传代可以参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

RF6A猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞系细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

运输和保存

干冰运输及复苏好存活RF6A猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞系细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

应用^[4][5]

RF6A猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞系可以用于茶叶中的脂肪酸及其对脉络膜—视网膜RF/6A内皮细胞生长的影响

探讨茶叶中的脂肪酸,是否与视网膜健康相关,正是论文研究的目的。

本文利用气相色谱法对茶树鲜叶不同叶位中脂肪酸的组成进行了测定和分析,结果表明茶叶的脂肪酸组成主要为长链脂肪酸,其中,以棕榈酸(C16:0)和亚油酸(C16:2)、亚麻酸(C18:3)为主。槠叶齐品种茶叶中亚油酸和亚麻酸的含量占脂肪酸总量的49.0～65.2%,含量最高的第二叶为3.16毫克/克鲜叶,其中亚油酸1.25毫克/克鲜叶,亚麻酸1.91毫克/克鲜叶;采用恒河猴脉络膜视网膜内皮细胞(Rhesur macaqud choroids-retinal endothelial cells,RF/6A)培养体系研究了棕榈酸、亚油酸、亚麻酸三种长链脂肪酸对视网膜内皮细胞生长的影响,通过研究亚油酸对自由基的清除作用及其对脂质体中氧消耗的分析,探讨了不饱和脂肪酸与视网膜脂质过氧化之间的关系。

MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测不同浓度脂肪酸单体作用不同时间对RF/6A细胞活力的影响,结果发现,不同结构的三种长链脂肪酸在低浓度时对细胞的影响有差异。小于400μM棕榈酸对细胞存活率影响不大,ω-6系列亚油酸和ω-3系列亚麻酸对细胞生长有促进作用,其中,40-200μM亚麻酸处理细胞24小时使细胞增殖达到极显著差异。

同时,三种脂肪酸在较高浓度下可抑制细胞活力。500μM棕榈酸、400μM亚油酸、300μM亚麻酸分别处理细胞不同时间(12,24,36,46小时)后能显著降低存活率。

参考文献

[1]Docosahexaenoic and arachidonic acid influence on preterm baboon retinal composition and function.Guan-Yeu Diau,Ellis R.Loew,Vasuki Wi jendran,et al.Investigative ophthalmology and visual science.2003

[2]The role of omega-3 long-chain polyunsaturated fatty acids in health and disease of the retina.SanGiovarmi JP,Chew EY.Prog Retin Eye Res.2005

[3]Ju-Ming;Saturated free fatty acids,palmitic acid and stearic acid,induce apoptosis by stimulation of ceramide generation in rat testicular Leydig cell.Lu,Zhao-Hui;Mu,Yi-Ming;Wang,Bao-An;Li,Xie-Ling;Lu.Biochemical and Biophysical Research Communications.

[4]Changes of Fatty Acid Contents,Lipoxygenase Activities,and Volatiles during Black Tea Mnaufacture.P.K.Mahanta,et al.J.Agric.Food Chem.1993

[5]陈萍.茶叶中的脂肪酸及其对脉络膜—视网膜RF/6A内皮细胞生长的影响[D].浙江大学,2006.