醋酸奥曲肽的固相合成

背景及概述

醋酸奥曲肽(octreotide)系美国 FDA于1988 年批淮上市的生长抑素(somatostatin)类似物,为分子内含有一个二硫键的环八肽,它对多种疾病及肿瘤有确切治疗效果。参考文献[1]方法及本课题组多肽合成的经验,选择固相肽合成。战略合成醋酸奥曲肽,合成路线见1。结果表明:用固相肽合成法合成醋酸奥曲肽及采用转盐工艺具有操作简单、易行、收率较高等特点，适合工业化生产[1]。

图1 醋酸奥曲肽的合成路线图

合成

Fmoc-Thr-OH(1)的合成

将 63 mL 水、63 mL丙酮、4.2 g(35.3 mmol)苏氨酸、3g(5.5 mmol)碳酸氢钠室温搅拌 30 min 后加入 Fmoc-OSu 12 g(35.6 mmol)中,反应过夜。反应完成后,粗品经硅胶G柱色谱纯化,洗脱剂为氯仿_甲醇(V:V=7:1),得化合物1纯品12g,收率97%，mp 134~136℃。

Fmoc-Thr-CH,OH(2)的合成

将3g(8.8 mmol)化合物1溶于无水四氢呋喃88 mL 中,冰浴搅拌下滴加 BH-THF 溶液88.6 mL(1 mol/L,88.3 mmol),冰浴下反应86后,加入1 mol/L 盐酸水溶液 100 mL,搅拌反应1h。粗品经硅胶G柱色谱纯化,洗脱剂为乙酸乙酯-石油醚(V:V=1:1),得化合物2纯品1g收率 34%，mp100~102℃。

Fmoc-Threoninolp-carboxybenzacetal(3)的合成

将 0.31 g(0.94 mmol)化合物 2、对-羧基苯甲醛 0.14 g(0.94 mmol)及 0.01g对_甲苯磺酸溶于 30 mL 氯仿中,回流反应5h后粗品用石油醚乙醚(V:V=1:1)重结晶,得化合物3纯品0.41 g，收率94%，mp86~88℃。

Fmoc-Thr-ol-Acetal-Resin(4)的制备

将459 mg(1 mmol)化合物3、DCC 251 mg(1.2 mmol)、HOBt 181 mg(1.2 mmol)、N_甲基吡咯烷酮(NMP)40 mL冰浴下反应 30 min,再室温反应2h后滤入装有 Rink Amide 树脂 446 mg(0.25 mmol,0.56 mmol/g 树脂)的固相肽反应器中,室温振荡过夜。树脂洗涤后,干燥得 895 mg化合物4,偶合率为 98%。

奥曲肽(5)的固相合成

将 895 mg(0.25 mmol)化合物 4用6 mL哌啶-DMF(V: V=1:5)脱 Fmoc 保护基,洗涤后,分别加入后续氨基酸残基(1 mmol)、DCC 251 mg(1.2 mmol)、HOBt 181 mg(1.2 mmol)、HBTU453 mg(1.2 mmol)、DIEA 0.2 mL(1.2 mmol)及 NMP 40 mL 合成目标肽。用 TFA 混合溶液.切脱树脂肽,滤液中加入乙醚,有沉淀析出,过滤,干燥得还原型奥曲肽5粗品 250 mg，收率98%。 ESI-MS m/z:1021.1[M+],实际相对分子质量为1021.1。

氧化型奥曲肽(6)的合成

将还原型奥曲肽5粗品 300mg用水稀释成1x10-4mol/L后,用1mol/L氨水调 pH至8.0，室温搅拌 3d。然后用 1 mol/L 醋酸溶液将反应液pH调至4.5,冻干得氧化型奥曲肽6粗品240mg，收率80%。ESI-MS m/z:1 019.7 M+,实际相对分子质量为1019.3。

醋酸奥曲肽的合成

将50mg氧化型奥曲肽6粗品经C18 RP-HPLC,采用梯度洗脱,A:三氟乙酸-水(V:V=0.1:100);B:三氟乙酸-乙腈-水(V:V:V=0.1:70:30),紫外监测,收集产物峰,加入醋酸调 pH至3,冻干得醋酸奥曲肽纯品 25.4 mg，收率45%。IR(KBr)o:3288,3061,2972,2930,1651,1538，1456，1405，1341，1235，1100，1080，745,701,653 cm-1。

参考文献

[1]Lewis I,Bruns C. Synthesis of somatostatin analogues incorporating nucleo amino acid [J]. Tetrahedron,1994,50(25):7485-7494.