高纯度的贝前列素钠及其制备方法和用途

 技术背景

近年来，肺动脉高压发病率的节节攀升，已逐渐成为的一大类心血管疾病。

临床研宄表明前列环素对肺动脉高压的治疗具有良好的效果。目前临床上使用的 前列环素类药物有依前列醇、曲前列环素、伊洛前列腺素、贝前列素钠。其中依前列醇、曲前 列环素和伊洛前列腺素采用静脉注射或吸入的方式给药，长期用药极其不方便。而贝前列 环素钠是具有口服活性的前列环素类似物，空腹口服后能被快速吸收，用药便捷，因而具有 广阔的应用前景。

目前国内仅有进口原料药，因而开发贝前列素钠的新工艺，将会打破进口药物的 垄断地位，为患者降低用药成本，因此研宄贝前列素钠合成工艺具有重大的现实意义。

EP0084856A1、US4880939A、Tetrahedron，1999, 55, 2449-2474、US5202447A、 W003/011849、US20100324313等文献描述了贝前列素酸（式2化合物）及其类似物的 制备方法，但未见文献报道式2化合物成盐后的纯化方法，虽然文献EP0084856A1和 W003/011849报道了式2化合物成盐的制备方法，但是其制备方法通过定量氢氧化钠的量， 而控制产品成盐的量，该方法存在明显缺陷，即式2化合物成盐不完全成或不可避免地导 致产品无机盐含量超标，无法作为原料药直接用于药物制剂的生产。

由此可见，现有技术制备贝前列素钠（式1化合物）存在显著缺陷，生产过程不可 控制，工艺不具有稳定性，质量不能保证，极易导致产品含有过量的无机盐，不利于工业化 生产的要求。因此，迫切需要进一步研宄能使式2化合物完全成盐转变为贝前列素钠，并且 有效去除产品中的无机盐的工业化生产方法，以获得符合药用标准的贝前列素钠原料药。

发明内容

 本发明旨在提供一种高纯度的的贝前列素钠及其制备方法和用途。

在本发明的方面，提供一种高纯度的贝前列素钠（式1化合物），结构如式I 所示，式1化合物中所含的无机盐的质量百分含量< 0. 5%。

在另一优选例中，所述无机盐的质量百分含量< 0. 2%。

在另一优选例中，所述无机盐的质量百分含量为0 %。

在本发明的方面，提供方面所述的高纯度的式1化合物的制备方法，所 述方法包括步骤：

a.将含有贝前列素钠粗品的溶液上样于大孔吸附树脂柱；

b.依次用水、有机溶剂的水溶液洗脱所述大孔吸附树脂柱，收集含有贝前列素钠 的收集液；

c.将收集液浓缩、干燥后得到所述高纯的式1化合物。

根据本发明，所述含有贝前列素钠粗品的溶液采用以下步骤获得：

(1)将式2化合物的有机溶剂溶液或水和有机溶剂的混合溶液与钠离子碱混合；

(2)将步骤（1)获得的溶液浓缩后溶于水或水和有机溶剂的混合溶液，得到含有 贝前列素钠粗品的溶液。

进一步地，在步骤（1)中，所述的有机溶剂选自：甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁 醇、异丁醇、叔丁醇、或其组合；和/或

在步骤（1)中，所述的钠离子碱选自：氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、氧化钠、甲醇 钠、乙醇钠、丙醇钠、异丙醇钠、丁醇钠、苯酚钠、或其组合。

在另一优选例中，所述式3化合物的C1-C4的醇类溶液与氢氧化钠、甲醇钠、乙醇 钠、丙醇钠、丁醇钠中的一种或其组合进行混合。

根据本发明，在步骤⑴中，所述式2化合物与所述钠离子碱的摩尔比为 1 : 1.1~1 : 50,或所述式3化合物与所述钠离子碱的摩尔比为1 : 1.1~1 : 50。

根据本发明，所述的大孔吸附树脂选自由苯乙烯与二乙烯苯聚合而成的非极性的 芳香吸附树脂；或具有甲基丙烯酸酯单元结构的中等极性的甲基丙烯酸吸附树脂。

在另一优选例中，所述大孔吸附树脂选自下述树脂的一种或其组合：XAD_1、 XAD-2、XAD-3、XAD-4、XAD-5、XAD-16、XAD-6、XAD-7、XAD-16HP、XAD-7HP、XAD-8、HP-10、 HP-20、HP-20ss、HP-21、HP-30、HP-40、HP-50、SP-825、SP-850、SP-70、SP-700、SP-207、 HP-2MG。

在另一优选例中，所述大孔吸附树脂选自下述树脂的一种或其组合：XAD-1、 XAD-2、XAD-3、XAD-4、XAD-5、XAD-6、XAD-7、XAD-8、HP-10、HP-20、HP-20ss、HP-21、HP-30、 HP-40、HP-50、SP-825、SP-850、SP-70、SP-700、SP-207、HP-2MG。

在另一优选例中，所述大孔吸附树脂选自下述树脂的一种或其组合：HP-20、 SP-207、HP-2MG 和 HP-20ss。

根据本发明，在步骤b中，所述的有机溶剂选自：甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁 醇、异丁醇、叔丁醇、丙酮、丁酮、乙腈、或其组合。

在另一优选例中，在步骤b中，所述的有机溶剂的水溶液中含有50vol %~ 100voI %的有机溶剂。较佳地，含有75vol %~100voI %的有机溶剂；更佳地，含有 80vol %~100vol %的有机溶剂。

根据本发明，在步骤c中，所述干燥为真空干燥或常压干燥。

本发明的第三个方面，提供方面所述的高纯度的式1化合物的用途，用于制 备改善慢性动脉闭塞性疾病引起的溃疡、间歇性跛行、疼痛或冷感症状的药物。

本发明的第四个方面，提供一种药物组合物，含有方面所述的高纯度的式1 化合物和药学上可接受的载体。

本发明提供了一种高纯度贝前列素钠，所含无机盐杂质的质量百分比含量 < 0. 5%或更低。本发明提供的制备低无机盐含量的高纯度贝前列素钠的方法，条件温和、 操作过程简单、收率高、产品稳定性良好、便于运输，在很大程度上减轻了工艺操作难度系 数，降低了生产成本。

具体实施方式

发明人经过深入研宄，发现贝前列素酸钠粗品的水溶液或水和有机溶剂通过大孔 吸附树脂柱，然后采用水和有机溶剂的水溶液洗脱树脂柱，收集含贝前列素钠的收集液，再 浓缩该收集液，并经过干燥的程序，即得到的无机盐含量极低的高纯度贝前列素钠，所含无 机盐杂质的质量百分比含量< 0. 5 %或更低。

本发明制备方法具有条件温和、操作过程简单、收率高、产品稳定性良好、便于运 输，在很大程度上减轻了工艺操作难度系数，降低了生产成本的优点。在此基础上，完成了本发明。

贝前列素钠

本发明提供的贝前列素钠，所含杂质无机盐的质量百分含量< 0. 5%。

在另一优选例中，所述无机盐的质量百分含量< 0. 2%。

在另一优选例中，所述无机盐的质量百分含量为0%。

本发明采用灼烧残渣法测定本发明方法制备的样品中的杂质无机盐残留量，所述 的检测方法如下：

将样品与硫酸混合，采用电炉加热到碳化，再放到马弗炉加热到600-700°C，然后 放到真空干燥箱中降温到室温，称量残留物的重量，计算无机盐的含量。由于1当量的贝前 列素钠本身含有1当量的钠盐，灼烧残渣生成〇. 5当量的氧化钠，故计算无机盐残留时需要 扣除该部分的无机盐。计算方法如下：无机盐残留％= [Ml5Sg-61.98*(l/2)*M/420. 47]/ M*100%。其中M代表灼烧前总重，Miag代表灼烧后总重，M25isg代表。本文所述的无机盐残 留均是折后无机盐残留。

在本发明中，"贝前列素钠"、"式1化合物"、"如式1所示的化合物"、"式1所示的 化合物"可以互换使用，均是指具有式1所示结构的化合物。

在本发明中，"贝前列素酸"、"式2化合物"、"如式2所示的化合物"、"式2所示的 化合物"可以互换使用，均是指具有式2所示结构的化合物。

如本文所用，化学式或名称应当包括所有的光学和立体异构体，以及存在这些异 构体的消旋混合物。

贝前列素钠的制备

本发明提供的高纯度贝前列素钠的制备方法，所述方法包括步骤：

a.将含有贝前列素钠粗品的溶液上样于大孔吸附树脂柱；

b.依次用水、有机溶剂的水溶液洗脱所述大孔吸附树脂柱，收集含有贝前列素钠 的收集液；

c.将收集液浓缩、干燥后得到所述的高纯度贝前列素钠。

步骤b中所述有机溶剂选自下述溶剂中的一种或一种以上的混合：甲醇、乙醇、异 丙醇、正丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、丙酮、丁酮、乙腈。

如本文所用，"贝前列素钠的粗品"或"式1所示化合物的粗品"可以互换使用。可 以使用本领域现有的方法得到式1所示化合物的粗品。

如本文所用，"含有贝前列素钠粗品的溶液"或"含有式1所示化合物的粗品的溶 液"可以互换使用，是指含有目标式1所示化合物和一种或多种非目标化合物的溶液，可以 是式1所示化合物的粗品溶解于水或水和有机溶剂的混合溶液而获得的，也可以是任何过 程得到的式1所示化合物的反应液，通过与溶于水或水和有机溶剂的混合溶液所得的混合 溶液。可以使用本领域现有的制备式I所示化合物的方法所获得的式1所示化合物的反应 液，包括但不限于EP0084856A1和W003/011849公开的制备方法。

如本文所用，"大孔吸附树脂"主要包括：由苯乙烯与二乙烯苯聚合而成的非极性 的芳香吸附树脂；或具有甲基丙烯酸酯单元结构的中等极性的甲基丙烯酸吸附树脂。可 以举例的是美国罗门哈斯（Rohmhaas)公司生产的XAD系列吸附树脂中的：XAD-l、XAD-2、 XAD-3、XAD-4、XAD-5、XAD-6、XAD-7、XAD-7HP、XAD-8、XAD-16、XAD-16HP、或其组合，以及日 本三菱化学公司生产Diaion HP系列吸附树脂中的HP-10、HP-20、HP-20ss、HP-21、HP-30、 HP-40、HP-50、SP-825、SP-850、SP-70、SP-700、SP-207、HP-2MG 或其组合。

如本文所用，"上样"是指将含有式1所示化合物的粗品的溶液和大孔吸附树脂接 触，使式1所示化合物的粗品吸附到大孔吸附树脂上的过程。所述的接触包括将大孔吸附 树脂直接投入溶液中，然后搅拌吸附；还有将大孔吸附树脂装入层析装置中，使溶液流过层 析柱。

将分子从大孔吸附树脂上"洗脱"下来，指通过改变大孔吸附树脂周围的缓冲液极 性从大孔吸附树脂上洗除该分子，该极性能使缓冲液与分子竞争大孔吸附树脂上的吸附位 点。

在一优选实施方式中，所述含有贝前列素钠粗品的溶液采用以下步骤获得：

 (1)将含有式2化合物的有机溶剂溶液或水和有机溶剂的混合溶液与钠离子碱混 合得到溶液1 ;

(2)将步骤（1)获得的溶液1浓缩后溶于水或水和有机溶剂的混合溶液，得到含有 贝前列素钠粗品的溶液。

在步骤（1)中，所述的有机溶剂选自下列溶剂中的一种或一种以上的混合物：甲 醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇。

在步骤（1)中，所述的钠离子碱选自下组中的一种或一种以上的组合：氢氧化钠、 碳酸氢钠、碳酸钠、氧化钠、甲醇钠、乙醇钠、丙醇钠、异丙醇钠、丁醇钠、苯酚钠。

在另一优选实施方式中，所述含有贝前列素钠粗品的溶液采用以下步骤获得：

(P )将式3化合物的C1-C4的醇类溶液与钠离子碱进行混合得到溶液P ;

其中，Rl选自C1-C4的烷基；

(2')将溶液1'浓缩后溶于水或水和有机溶剂的混合溶液，得到含有贝前列素 钠粗品的溶液。

在步骤（I')中，所述的有机溶剂选自下列溶剂中的一种或一种以上的混合物： 甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇。

在步骤V )中，所述的钠离子碱选自下组中的一种或一种以上的组合：氢氧化 钠、碳酸氢钠、碳酸钠、氧化钠、甲醇钠、乙醇钠、丙醇钠、异丙醇钠、丁醇钠、苯酚钠。

优选的，所述式3化合物的C 1-C4的醇类溶液与氢氧化钠、甲醇钠、乙醇钠、丙醇 钠、丁醇钠、或其组合进行混合。

众多实验结果表明，通过定量氢氧化钠的投料量而控制成盐的转化率，操作过程 难以控制，生产工艺不具有稳定性。一种情况是极易导致氢氧化钠的投料量过量，从而导致 产品的残留无机盐氢氧化钠超标，以及产品的PH值过高。另一种情况是氢氧化钠的投料量 不够，导致式2化合物成盐不完全，即得到式1化合物和式2化合物的混合物。这显然不符 合工业化生产的要求。

发明人经过研宄，通过使用过量的氢氧化钠，从而保证式2化合物（或式3化合 物）完全转变成式1化合物，良好的避免了文献成盐不完全的缺陷。发明人进一步进行了 深入研宄，对氢氧化钠的用量进一步进行了限定，发现式2化合物（或式3化合物）与氢氧 化钠的摩尔比为I : 1. 1-50均能保证式2化合物（或式3化合物）完全转变成式1化合 物，并且未发现任何降解杂质生成。发明人为了进一步说明使用过量氢氧化钠的合理性，进 行了稳定性实验研宄，实验表明贝前列素钠在碱溶液中稳定性良好，贝前列素钠在lmol/L、 2mol/L和3mol/L的氢氧化钠的水溶液中放置48h，HPLC纯度未发生任何变化。

发明人为了更加便捷的得到式2化合物的钠盐，意外发现将式2化合物与碳酸氢 钠、碳酸钠、氧化钠、甲醇钠、乙醇钠、丙醇钠、丁醇钠和苯酚钠混合后，亦能够良好的得到式 2化合物的钠盐。

发明人又意外地发现将式1化合物粗品的水溶液或水与有机溶剂的混合溶液上 样于树脂柱，使得式1化合物吸附于由苯乙烯与二乙烯苯聚合而成的非极性的芳香吸附树 月旨；或具有甲基丙烯酸酯单元结构的中等极性的甲基丙烯酸吸附树脂。如：XAD-1、XAD-2、 XAD-3、XAD-4、XAD-5、XAD-16、XAD-16HP、HP-10、HP-20、HP-20ss、HP-21、HP-30、HP-40、 HP-50、SP-825、SP-850、SP-70、SP-700、SP-207、XAD-6、XAD-7、XAD-7HP、XAD-8、HP-2MG 等。 然后采用水或低溶剂的水溶液洗脱树脂柱，将过量的氢氧化钠、氯化钠、硫酸钠等无机物质 洗脱除尽。由于无机盐水溶性良好，在水或低溶剂的水溶液洗脱条件下，上述大孔吸附树脂 不具有吸附力，虽然式1化合物也为钠盐，但是其有机大分子物质，在水或低溶剂的水溶液 的洗脱条件下，在上述树脂上吸附性仍是良好，仅在高比例的有机溶剂水溶液或有机溶剂 洗脱条件下，式1化合物不具有吸附力，因而采用梯度洗脱的方式能将无机盐和式1化合物 良好的分离。将含有式1化合物的收集液减压浓缩后，并经过常压或真空干燥的方式，能够 便捷的得到低无机盐的贝前列素钠。

在另一优选实施方式中，本发明的高纯度贝前列素钠的制备方法包括步骤：

a.将含有式2化合物的有机溶剂溶液或水和有机溶剂的混合溶液与钠离子碱混 合得到溶液1 ;

b.将溶液1减压浓缩后溶于水或水和有机溶剂的混合溶液，得到溶液2 ;c.将溶 液2通过大孔吸附树脂柱；

d.依次用水和有机溶剂的水溶液洗脱大孔吸附树脂柱，收集含有式1化合物的收 集液3 ;

e.将收集液3减压浓缩得到固体4 ;

f.将固体4干燥，得到高纯度、低无机盐含量的式1化合物。

贝前列素钠的用途及药物组合物

本发明提供的低无机盐含量的高纯度贝前列素钠的用途，用于制备改善慢性动脉 闭塞性疾病引起的溃疡、间歇性跛行、疼痛和冷感症状的药物。

鉴于此，本发明还提供了一种药物组合物，它包括安全、有效量范围内的低无机盐 的高纯度贝前列素钠和药学上可接受的载体。

如本文所用，术语"安全、有效量范围内的"是指：化合物的量足以明显改善病情， 而不至于产生严重的副作用。安全、有效量根据治疗对象的年龄、病情、疗程等具体情况来 确定。通常，每片药物组合物中含有10-100 μ g本发明高纯度贝前列素钠，较佳地15-25 μ g 本发明高纯度贝前列素钠，更佳地，含有20 μ g本发明高纯度贝前列素钠。

术语"药学上可接受的载体"是指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀 释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且使用没有过分的 毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在Remington' s Pharmaceutical Sciences(Mack Pub. Co.，N. J. 1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。在 贝前列素钠中药学上可接受的载体可包括液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中 还可能存在辅助性的物质，如崩解剂、润湿剂、乳化剂、PH缓冲物质等。

所述药物贝前列素钠可以根据不同给药途径制备成各种剂型。这些剂型以下面方 式施用：口服、喷雾吸入、直肠用药、鼻腔用药、颊部用药、局部用药、非肠道用药，如皮下、静 脉、肌肉、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内和颅内注射或输入，或借助一种外植储器用药。

本发明提到的上述特征，或是实施例提到的特征可以任意组合。本案例说明书的 所有特征可与任何贝前列素钠形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相 同、或等或相似目的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特 征的一般性例子。

本发明的主要优点在于：

1、本发明提供了一种新的低无机盐的贝前列素钠。

2、本发明的高纯度贝前列素钠，所含无机盐杂质的质量百分比含量< 0. 5%或更 低。

3、本发明提供了一种新的低无机盐的贝前列素钠制备方法。

4、本发明具有条件温和、操作过程简单、收率高、产品稳定性良好、便于运输，在很大程度上减轻了工艺操作难度系数，降低了生产成本。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条 件，或按照制造厂商所建议的条件，除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在 100mL的溶液中的溶质的重量。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意 义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文 中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

如本文所用，"HPLC纯度"是指采用HPLC检测制备的贝前列素钠产品，根据所得到 的色谱图谱，进行面积归一法而得到的贝前列素钠的峰面积在所有峰面积总和中所占有的 百分数。

本文实施例提及的HPLC检测方法的参数如下：

色谱柱：4. 6X250mm 5 μπι 的 C18 柱；流速：lml/min ;进样量：10 μ 1 ;柱温： 35°C ±5°C;检测波长：284nm ;运行时间：60min。流动相：Α :0. 1%的冰乙酸水溶液；B甲醇； 洗脱条件：A : B = 35 : 75 (体积比）。