龙葵中澳洲茄边碱的提取工艺

发布日期:2022/6/10 9:15:05

背景及概述

龙葵（学名：Solanum nigrum L. ）是茄科、茄属一年生草本植物，全草高30-120厘米；茎直立，多分枝；卵形或心型叶子互生，近全缘；夏季开白色小花，4-10朵成聚伞花序；球形浆果，成熟后为黑紫色。浆果和叶子均可食用，但叶子含有大量生物碱，须经煮熟后方可解毒。全株入药，可散瘀消肿，清热解毒。几乎全中国有分布。喜欢在田边生长，荒地及村庄附近。广泛分布在欧、亚、美洲的温带至热带地区。中药材龙葵是茄科植物龙葵的干燥地上部分，为我国传统中药材，味苦、微甘，性寒，归肺、肝、胃经，能清热解毒，消肿散结，消炎利尿；主治疮疖肿痛，尿路感染，小便不利，肿瘤等。全株入药，可散瘀消肿，清热解毒。【藏药】功用同苦茄《藏本草》。果治咳嗽，喉痛，失音。根驱蛔《迪藏药》。乌鲁祖玛：全草主治痈肿疔疮，牙痛，咽喉肿痛，癌肿，小便不利《民族药志三》。研究表明，龙葵中的生物碱类成分具有很好的抗肿瘤活性，引起了医药工作者的关注。龙葵中所含有的主要生物碱是甾体类生物碱，主要有澳洲茄边碱和澳洲茄碱、澳洲茄边碱等，苷元同是澳洲茄胺。澳洲茄边碱是从茄属植物中分离得到的一种甾体生物碱。澳洲茄边碱可以与c3样蛋白酶(SARS-CoV-2主蛋白酶)的氨基酸Phe8、Pro9、Ile152、Tyr154、Pro293、Phe294、Val297和Arg298相互作用。澳洲茄边碱来源于龙葵SolanumnigrumL.果实；丁茄SolanumsurattenseBurm.f，有散瘀消肿，止痛拔毒的作用。澳洲茄边碱是一种有毒的化学物质，会出现在茄科植物中，例如发芽的马铃薯、未成熟的蕃茄及茄子等，未成熟的龙葵果实也有澳洲茄边碱。澳洲茄边碱是一种衍生自澳洲茄胺（英语：solasodine）的糖苷生物碱。澳洲茄边碱也是一种不成功的抗癌用药Coramsine（英语：Coramsine）中的成分之一，另一种主要成分是澳洲茄碱。Coramsine只进行到初步临床试验，因结果不够充份而停止开发。

图1 澳洲茄边碱的化学结构式

制备

对龙葵药材中总生物碱的提取，以及澳洲茄碱的提取工艺研究已有报道。本研究首次以龙葵中澳洲茄边碱为评价指标，采用乙醇回流提取工艺条件，考察不同提取条件对澳洲茄边碱提取率的影响，为龙葵中有效活性成分提取工艺优化，为我国龙葵资源的进一步研究开发提供依据[1]。

实验操作：

仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪(柱温箱、四元泵、VwD检测器，美国AgiIent公司)，Bc-R501型旋转蒸发器(上海贝凯生物化工设备有限公司)，AE.240型电子分析天平[梅特勒托利多(上海)有限公司]。澳洲茄边碱对照品，龙葵药材(购于江苏省医药公司，批号090520，经江苏康缘药业股份有限公司研发总监丁岗高级工程师鉴定为茄科植物龙葵的干燥地上部分)，乙腈为色谱纯(Tedia公司)，其余试剂均为分析纯，水为纯净水。

澳洲茄边碱的提取工艺

提取溶剂的选择：将龙葵送入粉碎机进行粉碎，得到粉碎的龙葵，将粉碎的龙葵进行两次乙醇回流提取，从而得到提取液。将提取液进行浓缩。或考虑澳洲茄边碱的性质和生产实际需要，选用80％乙醇、1％盐酸、3％醋酸提取。取龙葵药材粗粉各100 g，共3份，其中醇提采用回流提取，8倍量80％乙醇提取2次，每次2 h；1％盐酸、3％醋酸提取采用冷浸法，20倍量酸液浸泡24 h。考察80％乙醇、1％盐酸、3％醋酸对提取率的影响，试验结果表明提取率分别为0.51，0.39，0.28mg/g，转移率分别为72.9％，55.7％，54.3％(以龙葵药材中澳洲茄边碱含量0.7 mg/g计)，因此选择乙醇回流的方法提取。

供试品的制备：分别称取龙葵药材粗粉，每份100 g，精密称定，按上述条件制备提取液，将提取液浓缩到500 mL，精确量取10 mL于蒸发皿上，水浴蒸干溶剂，残渣加甲醇溶解并转移至10mL量瓶中，甲醇定容，0.45μm滤膜滤过，备用。

从80％乙醇回流，1％盐酸、3％醋酸冷浸提取的结果来看，酸水冷浸提取澳洲茄边碱的转移率较低，由于在酸水中加热条件下澳洲茄边碱易发生水解，不宜采用酸水热浸或回流提取；采用乙醇回流提取，澳洲茄边碱的转移率较高，且较为稳定，后续处理简单易行，因此选择该提取方法。试验筛选得到的工艺条件，经验证重复性较好，便于工业化生产。

澳洲茄边碱的测定

色谱条件

Kromasicloo·5C18色谱柱(4.6mm×250 mm，5“m)，流动相60％乙腈-2 mmol/L，Na2HPO4溶液(70：30)，流速1 mL·min-1，测定波长203 nm，柱温30℃，理论板数按对照品峰计算不低于5 000。

标准曲线的制备：称取澳洲茄边碱对照品50.30mg，甲醇溶解，并定容到50 mL，摇匀，即得1.006g/L的澳洲茄边碱对照品储备液。分别吸取0.5，1，2，4，6，8，10 mL标准储备液至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取上述溶液各10mL进样，测定，以对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，计算得回归方程y=318.05X+2.55(r=0.9999)，结果表明澳洲茄边碱在0.5-10μg线性关系良好。