兔基质金属蛋白酶1(MMP-1)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

兔基质金属蛋白酶1(MMP-1)ELISA试剂盒可以特异性检测样本中基质金属蛋白酶1(MMP-1)的含量。

实验原理：

兔基质金属蛋白酶1(MMP-1)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔子基质金属蛋白酶-1（MMP-1）水平。用纯化的兔子基质金属蛋白酶-1（MMP-1）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入基质金属蛋白酶-1（MMP-1），再与HRP标记的基质金属蛋白酶-1（MMP-1）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的基质金属蛋白酶-1（MMP-1）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中兔子基质金属蛋白酶-1（MMP-1）浓度。

兔基质金属蛋白酶1(MMP-1)ELISA试剂盒

检测步骤：

1．将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出，置室温（20-25℃）平衡30 min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2．按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔板重新密封，保存于2-8℃，不要冷冻。

3．加标准品/样本50μL/孔，然后加入抗体工作液50μL/孔，再振荡混匀，用封板膜盖板，37℃反应30 min。

4．洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。

5．加入酶标记物100μL/孔，用封板膜盖板，37℃反应20 min。

6．洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。

7．显色：每孔加入底物缓冲液50μL，再加底物液50μL，轻轻振荡混匀，37℃环境避光显色10 min。

8．测定：每孔加入终止液50μL，轻轻振荡匀，设定酶标仪于450 nm处（在20 min内读完数据），测定吸光度值。

结果计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

应用^[4][5]

用于基质金属蛋白酶1，3，9基因单核苷酸多态性与收缩期高血压发病机制的研究

基质金属蛋白酶1,3,9及组织抑制因子3基因单核苷酸多态性与收缩期高血压关系的研究目的研究基质金属蛋白酶1,3,9及组织抑制因子3基因单核苷酸多态性与收缩期高血压的关系。

方法：从503例收缩期高血压患者（ISH组）,481例原发性高血压患者（EH组,非收缩期高血压）以及年龄相匹配的244例健康人群（NT组）,采用连接酶检测反应（LDR-PCR）测定各患者基质金属蛋白酶1,3,9及组织抑制因子3基因5个SNP位点MMP-1rs494379（A-519G）,MMP-3 rs3025058（5A/6A）,MMP-9 rs17576（R279Q）,MMP-9 rs3918242（C-1562T）,TIMP-3 rs5749511（T-1296C）的基因表型,分析各SNP位点中的等位基因与收缩期高血压之间的关系,并进行单体型分析。

结果多元logistic回归分析结果显示,在控制年龄、甘油三酯、低密度脂蛋白等混杂因素的情况下,MMP-3基因SNP位点rs3025058（5A/6A）中5A等位基因和MMP-9基因SNP位点rs3918242（C-1562T）中的T等位基因与收缩期高血压密切相关（P<0.001,Pcorr＜0.003；P=-0.009,Pcorr=0.027）；其他各SNP位点中的等位基因与收缩期高血压无显著相关性；

通过单体型分析还发现单体5A/G/C与原发性高血压相关,单体6A/A/T与收缩期高血压密切相关（Permutation p=0.0258;Permutation p=0.000002）。结论MMP-3和MMP-9基因的变异可显著增加我国汉族人群发生收缩期高血压的危险性。

参考文献

[1]Blood Pressure Response Under Chronic Antihypertensive Drug Therapy[J].Athanase Protogerou,Jacques Blacher,George S.Stergiou,Apostolos Achimastos,Michel E.Safar.Journal of the American College of Cardiology.2009(5)

[2]Relations of Matrix Remodeling Biomarkers to Blood Pressure Progression and Incidence of Hypertension in the Community[J].Ravi Dhingra,Michael J.Pencina,Peter Schrader,Thomas J.Wang,Daniel Levy,Karol Pencina,Deborah A.Siwik,Wilson S.Colucci,Emelia J.Benjamin,Ramachandran S.Vasan.Circulation.2009(8)

[3]Receptor for AGE（RAGE）and its ligands—cast into leading roles in diabetes and the inflammatory response[J].Shi Fang Yan,Ravichandran Ramasamy,Ann Marie Schmidt.Journal of Molecular Medicine.2009(3)

[4]Receptor for Advanced Glycation End Products（RAGE）Deficiency Attenuates the Development of Atherosclerosis in Diabetes[J].Soro-Paavonen,Aino,Watson,Anna M D,Li,Jiaze,Paavonen,Karri,Koitka,Audrey,Calkin,Anna C,Barit,David,Coughlan,Melinda T,Drew,Brian G,Lancaster,Graeme I,Thomas,Merlin,Forbes,Josephine M,Nawroth,Peter P,Bierhaus,Angelika,Cooper,Mark E,Jandeleit-Dahm,Karin A.Diabetes.2008(9)

[5]黄榕.基质金属蛋白酶1，3，9基因单核苷酸多态性与收缩期高血压发病机制的研究[D].南方医科大学,2010.