SK-OV-3人卵巢癌细胞的应用

背景^[1-3]

SK-OV-3人卵巢癌细胞是从一位64岁白人女性卵巢腺癌患者的腹腔积液分离得到。该细胞对肿瘤坏死因子和几种细胞毒性药物（包括白喉毒素、顺铂和阿霉素）耐受。在裸鼠中成瘤，且形成与卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。

培养条件：生长培养基McCoy's 5A＋10%FBS＋1%P/S，空气，95%；CO2，5%；温度：37℃。

SK-OV-3人卵巢癌细胞

细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为消化时间，记录消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。

用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。

应用^[4][5]

用于人卵巢癌细胞系SK-OV-3中肿瘤干/祖样细胞的研究

通过球形体形成法对人卵巢癌细胞系SK-OV-3中肿瘤干／祖样细胞进行分离、培养扩增,并对其干／祖样细胞的特性进行鉴定,为研究卵巢癌发病机理及治疗奠定基础。

方法：1.球形体形成法分离人卵巢癌细胞系SK-OV-3中肿瘤干／祖样细胞。

2. 将以球形体形成法筛选出的球形体形成细胞于CM与SGM交替更换培养基观察其多向分化和自我更新的潜能。

3. 双层软琼脂集落形成实验软琼脂培养检测球形体形成细胞的非依赖性锚定生长能力。

4. 通过PI染色利用FCM观察球形体形成细胞的细胞周期分布特点。

5. 检测球形体形成细胞在10μg/ml DDP作用下的凋亡率,分析其对DDP的抵抗作用。

6. 流式细胞仪检测球形体形成细胞中SP细胞及ALDH+细胞的比例。

7. 实时荧光定量PCR检测球形体形成细胞中干／祖细胞基因Oct4、Nanog的表达情况。8.球形体形成细胞裸鼠体内致瘤性的检测。

结果：1.人卵巢癌细胞系SK-OV-3细胞中的极少部分肿瘤干／祖样细胞可在无血清特殊生长培养基中以球形体样悬浮长并长期培养、扩增并可连续传代50代以上。

2. 球形体形成细胞可在CM中贴壁生长,再更换为SGM后,有极少部分细胞以球形体样悬浮。

3. 球形体形成细胞具有强锚定非依赖性生长能力,在双层软琼脂培养基中可呈克隆样生长,克隆形成率为6.83%,显著高于SK-OV-3细胞的克隆形成率0.41%。

参考文献

[1]Melanoma contains CD133 and ABCG2 positive cells with enhanced tumourigenic potential[J].Elena Monzani,Floriana Facchetti,Enrico Galmozzi,Elena Corsini,Anna Benetti,Chiara Cavazzin,Angela Gritti,Andrea Piccinini,Danilo Porro,Mario Santinami,Gloria Invernici,Eugenio Parati,Giulio Alessandri,Caterina A.M.La Porta.European Journal of Cancer.2007(5)

[2]Side population purified from hepatocellular carcinoma cells harbors cancer stem cell–like properties[J].Tetsuhiro Chiba,Kaoru Kita,Yun‐Wen Zheng,Osamu Yokosuka,Hiromitsu Saisho,Atsushi Iwama,Hiromitsu Nakauchi,Hideki Taniguchi.Hepatology.2006(1)

[3]SP analysis may be used to identify cancer stem cell populations[J].Annamaria Hadnagy,Louis Gaboury,Raymond Beaulieu,Danuta Balicki.Experimental Cell Research.2006(19)

[4]Apoptosis resistance can be used in screening the markers of cancer stem cells[J].Wei Chen,Guo-min Wang,Yu-jun Liu.Medical Hypotheses.2006(6)

[5]赵惠丰.人卵巢癌细胞系SK-OV-3中肿瘤干/祖样细胞的研究[D].天津医科大学,2008.