Α-氰基-4-羟基肉桂酸的制备方法

背景及概述^[1]

Α-氰基-4-羟基肉桂酸可用于制备一种新型吡啶类有机小分子修饰的肉桂酸衍生物，该衍生物可应用于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱中样品信号增强。

应用^[1-2]

报道一、

新型吡啶类有机小分子修饰的肉桂酸衍生物(Ⅰ)的制备

根据曼尼希反应机理，制备N-叔丁氧羰基新型吡啶类小分子前体，具体为：将0.831g多聚甲醛和3.37g双(2-吡啶基甲基)胺溶于48mL的异丙醇/水(体积比为3:5)的混合溶剂中，然后加入1mol/L的盐酸将体系pH调至8，然后80℃加热搅拌反应3小时。之后在搅拌下，将溶解1.0g的N-叔丁氧羰基-L-酪氨酸甲酯的异丙醇/水溶液滴加至上述体系中，并升温至110℃，搅拌回流反应13小时。

待上述反应结束后，将反应物冷却至室温，然后通过旋蒸除去异丙醇，之后转移反应体系至冰浴中将反应物沉淀出来，并倾倒出上层清液。之后加入乙酸乙酯将样品重新溶解，并用饱和碳酸氢钠溶液和卤水洗涤，之后加入硫酸钠进行干燥。待上述操作结束之后，用硅胶柱进行样品分离纯化流动相为二氯甲烷/甲醇(体积比为40:1)，最后收集产品。

称取2.1g上述产物并溶于12.8mL无水二氯甲烷中，之后在冰浴条件下边搅拌边逐滴加入12.8mL99.0％的三氟乙酸，滴加完毕之后，将反应体系转移至25℃下反应2小时。反应结束后，产物通过旋蒸除去二氯甲烷并重新溶于50mL水中，并在冰浴条件下加入30.0％的氨水进行碱化至pH值为8。反应结束后加入二氯甲烷进行萃取，之后用硫酸镁干燥，最后旋蒸浓缩并收集样品。

称取460mg上述制备的样品和180mgα-氰基-4-羟基肉桂酸作为反应物，再分别称取1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐214mg，1-羟基苯并三唑169.8mg和N,N-二异丙基乙胺394.5mg作为缩合剂，将上述反应物充分溶于18mLN,N-二甲基甲酰胺，之后在室温下搅拌反应6h。待反应结束后旋蒸除去N,N-二甲基甲酰胺，并用乙酸乙酯进行重溶并萃取。萃取得到的样品用硫酸镁进行干燥除水，最后用二氯甲烷/甲醇/三乙胺(体积比为20:1:0.1)的混合溶液作为流动相将样品进行柱层析分离纯化，最后收集产物(衍生物Ⅰ)。

称取10mg上述产物并溶于0.1％三氟乙酸的乙腈/水(体积比为6:4)混合溶液中，然后取1μL该溶液与1μL牛血清白蛋白(1mg/mL)的酶解液混合，之后取1μL该混合液滴在质谱靶板上进行质谱检测。通过与未修饰的α-氰基-4-羟基肉桂酸比较发现，该衍生物对牛血清白蛋白酶解液中的一些组分有较明显的信号增强效果。

报道二、

CN201710116185.6针对常见基质Α-氰基-4-羟基肉桂酸在MALDI-TOFMS小分子检测时背景干扰大的不足，提供一种Α-氰基-4-羟基肉桂酸与硅基介孔材料共价偶联的新基质，降低了基质的背景干扰。

技术方案概述如下：硅基介孔材料表面首先修饰氨基，之后Α-氰基-4-羟基肉桂酸表面羧基被EDC，NHS活化，与修饰氨基的硅基介孔材料共价结合，形成新型基质。

(1)配制10～100mg/mL的介孔材料悬浊液，超声辅助分散，溶剂为无水乙醇；

(2)按照3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)：硅基介孔材料体积比0.5～3∶1的比例加入APTES，50～100℃水浴搅拌反应4～12小时；

(3)反应液2000r/min～10000r/min离心2～10min；依次用去离子水和无水乙醇洗涤3～5次；

(4)孔径为0.22μm以下的滤膜抽滤，滤膜截留的合成产物30～60℃真空干燥，制得硅基介孔材料@APTES；

(5)按照硅基介孔材料@APTES，Α-氰基-4-羟基肉桂酸，N-羟基丁二酰亚胺(NHS)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)质量比1∶1∶3～5∶12～20的比例混合，加入纯水使Α-氰基-4-羟基肉桂酸最终浓度为10～50mg/mL，避光条件下反应4h以上；

(6)纯水离心洗涤3次后，用乙腈洗涤，自然干燥备用。

参考文献

[1][中国发明]CN201711282263.6新型吡啶类有机小分子化合物修饰肉桂酸衍生物的制备及应用

[2]CN201710116185.6一种α-氰基-4-羟基肉桂酸（CHCA）与硅基介孔材料共价偶联基质的合成方法