小鼠外周血单个核细胞的应用

背景^[1-3]

小鼠外周血单个核细胞采用密度梯度离心法结合差速贴壁法分离自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中首次提出外周血这一新概念。

单核细胞起源于骨髓中的造血干细胞，并在骨髓中发育。当它们从骨髓进入血液时仍然是尚未成熟的细胞。与其他血细胞比较，单核细胞内含有更多的非特异性脂酶，并且具有更强的吞噬作用。单核细胞在血液中停留2-3天后迁移到周围组织中，细胞体积继续增大，直径可达50-80μm，细胞内所含的溶酶体颗粒和线粒体的数目也增多，成为成熟的细胞。

小鼠外周血单个核细胞

固定在组织中的单核细胞称为组织巨噬细胞，它们经常大量存在于淋巴结、肺泡壁、骨髓、肝和脾等器官。激活了的单核细胞和组织巨噬细胞能生成并释放多种细胞毒、干扰素和白细胞介素，参与机体防卫机制，还产生一些能促进内皮细胞和平滑肌细胞生长的因子。在炎症周围单核细胞能进行细胞分裂，并包围异物。

应用^[4][5]

用于苯短期重复染毒对小鼠外周血单个核细胞及脾脏免疫功能的影响研究

通过构建苯染毒小鼠模型,从免疫器官、免疫细胞和免疫分子等多个水平研究苯染毒对小鼠外周血单个核细胞及脾脏的免疫毒性,为进一步探究苯的免疫毒性效应及其作用机制提供实验研究依据。

方法:1.将40只6-8周龄的雄性无特定病原体级BALB/c小鼠随机分为4组:对照组（玉米油）、低剂量组（50mg/kg）、中剂量组（150mg/kg）和高剂量组（500mg/kg）,每组10只。每天经口灌胃1次,每周5天,连续4周。染毒期间每周观察记录小鼠体重变化,末次染毒24小时后进行各项指标的检测。

2. 采取小鼠的外周血进行血常规分析;使用酶联免疫吸附试验测定血浆中免疫球蛋白G、白介素-2和白介素-6的含量;使用Mito SOX荧光染料结合流式细胞术测定小鼠外周血单个核细胞线粒体ROS含量,使用ATP测定试剂盒和BCA蛋白测定试剂盒测定小鼠外周血单个核细胞ATP的含量;使用硫代巴比妥酸法测定丙二醛的含量、二硫代二硝基苯甲酸法测定谷胱甘肽过氧化物酶的活力、羟胺法测定总超氧化物歧化酶的活力。

3. 无菌解剖小鼠,摘取脾脏并计算脾脏系数,并对小鼠脾脏进行病理学检查;使用TUNEL检测试剂盒检测脾脏细胞的凋亡情况;使用Cell Counting Kit-8试剂盒测定小鼠脾脏中T、B淋巴细胞增殖能力。

4.应用同位素标记相对和绝对定量技术分析比较高剂量组和对照组中小鼠的脾脏蛋白质表达差异,利用Gene Ontology和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes数据库对差异蛋白进行生物信息学分析,找出关键差异表达蛋白并应用Wes全自动蛋白定量分析系统和实时荧光定量PCR技术验证差异蛋白及其相应的mRNA表达水平。

参考文献

[1]Carcinogenicity of benzene[J].Dana Loomis,Kathryn Z Guyton,Yann Grosse,Fatiha El Ghissassi,Véronique Bouvard,Lamia Benbrahim-Tallaa,Neela Guha,Nadia Vilahur,Heidi Mattock,Kurt Straif.The Lancet Oncology.2017(12)

[2]Regulation of Signal Transduction by Reactive Oxygen Species in the Cardiovascular System[J].David I.Brown,Kathy K.Griendling.Circulation Research.2015(3)

[3]Benzanthrone induced immunotoxicity via oxidative stress and inflammatory mediators in Balb/c mice[J].Prachi Tewari,Ruchi Roy,Sakshi Mishra,Payal Mandal,Ashish Yadav,Bhushan P.Chaudhari,Rajnish K.Chaturvedi,Premendra D.Dwivedi,Anurag Tripathi,Mukul Das.Immunobiology.2014

[4]Diamond–Blackfan anemia with mandibulofacial dystostosis is heterogeneous,including the novel DBA genes TSR2 and RPS28[J].Karen W.Gripp,Cynthia Curry,Ann Haskins Olney,Claudio Sandoval,Jamie Fisher,Jessica Xiao‐Ling Chong,Lisa Pilchman,Rebecca Sahraoui,Deborah L.Stabley,Katia Sol‐Church.Am.J.Med.Genet..2014(9)

[5]胡辉.苯短期重复染毒对小鼠外周血单个核细胞及脾脏免疫功能的影响[D].军事科学院,2019.