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脱氧助间型霉素的合成和纯化方法

发布日期:2021/8/25 13:07:54

背景及概述[1]

脱氧助间型霉素又叫喷司他丁,化学名为(8R)-3-(2-脱氧-β-D-赤-戊呋喃糖基)-3,4,7,8-四氢咪唑并[4,5-d][1,3]二氮杂草-8-醇,是拟嘌呤类的抗肿瘤药,主要用于毛细胞白血病(hairy cell leukemia,缩写HCL)等的治疗。

提取纯化方法[1]

用氢氧化钠溶液将喷司他丁发酵液的pH调至7.9,加入3%(w/v)珍珠岩助滤剂,经板框过滤,得到喷司他丁滤液。将700ml D261树脂(上海华震科技贸易公司生产)装入Φ50X400mm的层析柱中,对树脂进行酸洗(2升2mol/L盐酸浸泡6小时)、水洗(纯化水洗涤至中性)、碱洗(2升2mol/L氢氧化钠浸泡6小时)、水洗(纯化水洗涤至中性),得到预处理的D261树脂。取5升喷司他丁滤液,以每分钟25ml的速率泵入层析柱,收集流出液A。滤液全部上完后再泵入1300ml升纯化水,淋洗层析柱,收集流出液B。合并流出液A、B,呈浅黄色,而喷司他丁的回收率为96.8%。

合成方法[2]

步骤1:3-((2R,4S,5R)-4-羟基-5-(羟甲基)-四氢-呋喃-2-基)-6,7-二氢咪唑 并[4,5-d]-[1,3]二氮杂卓-8(3H)-酮的合成

将1.5g氯化钾溶解于pH 8.0的0.5l 20mM磷酸盐缓冲液中。然后,在搅拌下加入 10g 2'-脱氧尿苷和20ml核苷脱氧核糖基转移酶溶液(10mg/ml)。将所得的溶液加热至25- 30℃,并加入2.0g 6,7-二氢咪唑并[4,5-d][1,3]二氮杂卓-8(3H)-酮盐酸盐单二甲基亚 砜。将反应混合物在25-30℃搅拌3小时。使用低压反相柱色谱法纯化所得的产物,以获得 1.58g(78%)纯物质(通过HPLC测定,纯度大于99%)。

步骤2:(R)-3-((2R,4S,5R)-4-羟基-5-(羟基甲基)-四氢-呋喃-2-基)-3,6,7, 8-四氢咪唑并[4,5-d]-[1,3]二氮杂卓-8-醇(即,喷司他丁)的合成。

在N2气氛下,将1.0g 3-((2R,4S,5R)-4-羟基-5-(羟甲基)-四氢呋喃-2-基)-6,7- 二氢咪唑并[4,5-d]-[1,3]二氮杂卓-8(3H)-酮加入至含有20mgRuCl(对伞花烃)[(R,R)- Ts-DPEN]的烧瓶中。加入10ml三乙胺和3.3ml甲酸的脱气混合物。将反应混合物在N2吹扫下 在40℃搅拌1天,直至达到>99%的转化(如通过HPLC测定)。然后,将反应混合物倒入200ml pH 7.5的100mM磷酸盐缓冲液中。使用低压反相柱色谱法纯化产物,以获得0.84g(83%)纯 的喷司他丁,其具有约1000:1的8R/8S异构体比例(如通过HPLC测定)。

参考文献

[1] [中国发明] CN200910096059.4 一种喷司他丁的提取纯化方法

[2] [中国发明] CN201680039712.1 用于合成喷司他丁的方法

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