氨基酸脱羧酶试验培养基的应用

背景^[1-3]

氨基酸脱羧酶试验培养基用于细菌的氨基酸试验对照实验。主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。如沙门菌属中除伤寒和鸡沙门菌外，其余沙门菌的赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶均为阳性。志贺菌属除宋内和鲍氏志贺菌外，其他志贺菌均为阴性。

成分：蛋白胨5g；酵母浸膏3g；葡萄糖1g；蒸馏水1000mL；1.6%滇甲酚紫－乙醇溶液1mL；L－氨基酸或DL－氨基酸0.5或1g/100mL；pH6.8。

氨基酸脱羧酶试验培养基

制法：除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶100mL，分别加入各种氨基酸：赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。L－氨基酸按0.5%加入，DL－氨基酸按1%加入。再行校正pH至6.8。对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内，每管0.5mL，上面滴加一层液体石蜡，115℃高压灭菌10min。

试验方法：从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36±1℃培养18～24h，观察结果。氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。

试验原理：具有氨基酸脱羧酶的细菌，能分解氨基酸使其脱羧生成胺（赖氨酸→尸胺，鸟氨酸→腐胺，精氨酸→精胺）和二氧化碳，使培养基变为碱性进而使指示剂显示出黄色。

应用^[4][5]

用于一种耐药变形杆菌的分离、鉴定及其免疫学效应的实验研究

采用肠道菌选择培养基、鉴别培养基分离泌尿系统反复感染患者的尿液样本中的变形杆菌，经进一步鉴定和传代减毒后感染小鼠，分析脾细胞体外增殖能力和脾细胞分泌IL-2、IFN-γ水平及抗体变化；并通过流式细胞仪、酶联免疫斑点试验分析乙肝病人外周血树突细胞信号分子表达和IFN-γ水平变化，探讨变形杆菌对细胞免疫和体液免疫的影响，为变形杆菌菌苗研究奠定了实验基础。

方法1．留取泌尿系统反复感染患者的尿液样本，将所取样品用分区划线法分别接种于肠道菌选择培养基（S，S琼脂）及鉴别培养基（伊红美蓝琼脂）平皿中，置37℃温箱培养18～24小时后，观察菌落特征，在培养后的平皿中找到符合变形杆菌菌落特点的菌落。将挑出的菌落做进一步的鉴定。

2．用Blendon镀银染色后观察、三糖铁琼脂培养基试验、动力靛基质尿素酶试验、苯丙氨酸脱氨酶试验对挑出的菌落作初步鉴定。

3．从泌尿系统反复感染患者的尿液样本中分离的变形杆菌通过特殊的处理，将原有的毒性减低，并做毒性试验以证明其毒性的降低。再用三糖铁琼脂培养基试验、动力靛基质尿素酶试验、苯丙氨酸脱氨酶试验、迁徙生长试验、硫化氢产生试验、液化明胶试验、西蒙枸橼酸盐试验、吲哚试验、氨基酸脱羧酶试验、糖（醇、苷）类发酵试验（麦芽糖、木糖）、对氯霉素的敏感性试验对特殊处理后的菌种进行最后鉴定。鉴定无误后将经特殊处理的菌种接种、培养、采集、杀菌、离心、纯化，稀释成2×1011／mL的原液，并对原液进行无菌试验和原液检定。

4．将变形杆菌原液用RPMI-1640培养液稀释成2×1010／mL。采集慢性乙型肝炎患者和健康人肝素抗凝外周血，分离外周血单个核细胞，并体外定向诱导分化和培养树突状细胞。对照组为RPMI-1640培养基（含10％小牛血清）500μL+培养的树突细胞；实验组为RPMI-1640培养基（含10％小牛血清）500μL+培养的树突细胞+变形杆菌稀释液，用流式细胞仪检测CD80，CD86的表达水平。

参考文献

[1]Detection of Cellular Immunity to Rabies Antigens in Human Vaccinees[J].Susan M.Moore,Melinda J.Wilkerson,Rolan D.Davis,Carol R.Wyatt,Deborah J.Briggs.Journal of Clinical Immunology.2006(6)

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[3]Different composition of intrahepatic lymphocytes in the immune‐tolerance and immune‐clearance phase of chronic hepatitis B[J].D.Sprengers,R.G.van der Molen,J.G.Kusters,B.Hansen,H.G.M.Niesters,S.W.Schalm,H.L.A.Janssen.J.Med.Virol..2006(5)

[4]Hepatitis B virus‐induced defect of monocyte‐derived dendritic cells leads to impaired T helper type 1 response in vitro:mechanisms for viral immune escape[J].SusanneBeckebaum,Vito R.Cicinnati,XiaZhang,StanislavFerencik,AndreaFrilling,HansGrosse‐Wilde,Christoph ErichBroelsch,GuidoGerken.Immunology.2003(4)

[5]王鹏.一种耐药变形杆菌的分离、鉴定及其免疫学效应的实验研究[D].军医大学,2007.