KCL-22人慢性粒细胞白血病传代细胞系的应用

背景^[1-3]

KCL-22人慢性粒细胞白血病传代细胞系是来源于人慢性粒细胞白血病的可传代细胞系，主要用于体外KCL-22人慢性粒细胞白血病细胞的研究。

慢性粒细胞白血病是一种影响血液及骨髓的恶性肿瘤，它的特点是产生大量不成熟的白细胞，这些白细胞在骨髓内聚集，抑制骨髓的正常造血；并且能够通过血液在全身扩散，导致病人出现贫血、容易出血、感染及器官浸润等。

KCL-22人慢性粒细胞白血病传代细胞系

慢性粒细胞白血病的病因仍未明确，但认为费城染色体与该病密切相关，大约有90至95%的病人出现费城染色体。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于ST3GAL家族和ST6GALNAC家族在人慢性粒细胞白血病多药耐药性中的作用研究

通过研究ST3GAL和ST6GALNAC家族在三对人慢性粒细胞白血病细胞株及慢性粒细胞白血病患者外周血单个核细胞中的差异表达,明确ST3GAL和ST6GALNAC家族与人慢性粒细胞白血病多药耐药的相关性,并且研究miR-4701-5p以ST3GAL1作为靶点和miR-4299以ST6GALNAC4为靶点对人慢性粒细胞白血病多药耐药的影响,从而为预测和诊断慢性粒细胞白血病多药耐药性,寻求逆转药物提供新策略和靶点。

方法：（1）采用real-time PCR技术和western-blot技术检测三对人慢性粒细胞白血病细胞株及慢性粒细胞白血病患者外周血单个核细胞中的ST3GAL和ST6GALNAC家族的表达情况,筛选出具有差异表达ST基因。

（2）特异性下调、上调差异表达的ST3GAL1基因和ST6GALNAC4基因,检测干扰、过表达前后KCL22/ADR、KCL22细胞在体内、体外对化疗药物敏感性的变化。

（3）采用real-time PCR检测三对化学敏感和化学耐药的人慢性粒细胞白血病细胞株和临床慢性粒细胞白血病患者外周血单个核细胞中miR-4701-5p和miR-4299的表达变化。

miR-4701-5p的模拟物（100nM）转染到KCL22细胞中,将miR-4701-5p的拮抗剂转染到KCL22/ADR细胞中,然后检测ST3GAL1表达的变化。将miR-4299的模拟物（100nM）转染到KCL22/ADR细胞中,将miR-4299的拮抗剂转染到KCL22细胞中,然后对ST6GALNAC4表达的变化进行检测。

将ST3GAL1和ST6GALNAC4的3’-UTR的靶基因序列（wt 3’-UTR）和ST3GAL1和ST6GALNAC4的突变基因序列（mt 3’-UTR）克隆到荧光素酶报告基因载体,然后将wt.3’-UTR或mt 3’-UTR载体和miR-4701-5p模拟物转染到KCL22细胞中以及miR-4299模拟物转染到KCL22/ADR细胞中,进行荧光素酶活性检测。

参考文献

[1]miR?181b increases drug sensitivity in acute myeloid leukemia via targetingHMGB1 and Mcl-1[J].Fei Lu,Jingru Zhang,Min Ji,Peng Li,Yahui Du,Hongchun Wang,Shaolei Zang,Daoxin Ma,Xiulian Sun,Chunyan Ji.International Journal of Oncology.2014(1)

[2]Glycomic alterations are associated with multidrug resistance in human leukemia[J].Zhaohai Zhang,Yongfu Zhao,Lili Jiang,Xiaoyan Miao,Huimin Zhou,Li Jia.International Journal of Biochemistry and Cell Biology.2012(8)

[3]Sialylation of epidermal growth factor receptor regulates receptor activity and chemosensitivity to gefitinib in colon cancer cells[J].Jung-Jin Park,Jae Youn Yi,Yeung Bae Jin,Yoon-Jin Lee,Jae-Seon Lee,Yun-Sil Lee,Young-Gyu Ko,Minyoung Lee.Biochemical Pharmacology.2012(7)

[4]Serum neopterin,sialic acid and nitric oxide levels in dogs with malignant mammary tumours[J].N.Tascene,G.K?smal?,S.Vural,H.Karagul,T.Sel.Veterinary and Comparative Oncology.2012(2)

[5]李岩.ST3GAL家族和ST6GALNAC家族在人慢性粒细胞白血病多药耐药性中的作用[D].大连医科大学,2015.