CTLL-2小鼠T淋巴细胞的应用

背景^[1-3]

CTLL-2小鼠T淋巴细胞是源自C57BL/6的细胞毒性的T淋巴细胞,是具有细胞毒作用的IL-2依赖型的T-细胞株。

T淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞（胚胎期则来源于卵黄囊和肝）。在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。

CTLL-2小鼠T淋巴细胞

成熟的T细胞经血流分布至外周免疫器官的胸腺依赖区定居，并可经淋巴管、外周血和组织液等进行再循环，发挥细胞免疫及免疫调节等功能。T细胞的再循环有利于广泛接触进入体内的抗原物质，加强免疫应答，较长期保持免疫记忆。T细胞的细胞膜上有许多不同的标志，主要是表面抗原和表面受体。这些表面标志都是结合在细胞膜上的巨蛋白分子。

复苏细胞步骤：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

应用^[4][5]

用于淋巴细胞MHC-I在乳腺癌患者中的表达变化及其对CTL功能的影响研究

探讨淋巴细胞MHC-Ⅰ在评估肿瘤患者细胞免疫状态中的价值。

通过RNAi技术从基因水平抑制CTL细胞MHC-Ⅰ基因表达,利用单克隆抗体封闭CTL细胞膜表面的MHC-Ⅰ蛋白,研究CTL细胞的功能变化。从而探讨CTL细胞表面的MHC-Ⅰ分子对CTL细胞功能的影响。

构建小鼠荷瘤+皮肤移植模型,诱导高强度的移植排斥反应,研究移植排斥反应时外周血淋巴细胞MHC-Ⅰ的表达规律,探讨外周血淋巴细胞MHC-Ⅰ变化对肿瘤体内生长的影响。

方法：通过实时荧光定量PCR检测乳腺癌患者外周血淋巴细胞MHC-Ⅰ不同位点HLA-Ⅰ、HLA-A、HLA-B mRNA的不同表达变化,利用流式细胞技术检测乳腺癌患者外周血淋巴细胞不同细胞亚群,CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、B细胞、自然杀伤细胞（NK）表面MHC-Ⅰ蛋的不同变化规律。分析外周血淋巴细胞MHC-Ⅰ与乳腺癌分期和进展的关系。并进一步随访手术和化疗的乳腺癌患者,研究手术和化疗对外周血淋巴细胞MHC-Ⅰ表达的影响。

小鼠接种4T1乳腺癌细胞,构建小鼠荷乳腺癌模型,动态观察肿瘤进展不同时间外周血淋巴细胞和肿瘤浸润淋巴细胞MHC-Ⅰ的变化规律,分析两者间的相互关系。

利用针对小鼠MHC-Ⅰ基因的siRNA,抑制细胞毒性T淋巴细胞系CTLL-2 MHC-Ⅰ基因的表达,进一步检测CTLL-2功能变化；通过抗小鼠MHC-Ⅰ单克隆抗体封闭DC细胞诱导的4T1抗原特异性CTL细胞表面MHC-Ⅰ分子,观测对CTL细胞功能的影响。从而研究CTL细胞MHC-Ⅰ的功能。

参考文献

[1]Rat nigral xenografts survive in the brain of MHC classⅡ-,but not classⅠ-deficient mice.Duan W M,Westerman M A,Wong G,et al.Neuroscience.2002

[2]Molecular regulation of MHC classⅠchain-related protein A expression after HDAC-inhibitor treatment of Jurkat T cells.Andresen L,Jensen H,Pedersen M T,et al.J Immunol.2007

[3]Implication of genetic polymorphisms for kidney transplant outcome.Sato,S,M Miura,M.Saito,et al.Nippon Jinzo Gakkai Shi.2008

[4]Intratumoral T-cell infiltrates and MHC classⅠexpression in patients with stageⅣmelanoma.Al-Batran S E,Rafiyan M R,Atmaca A,et al.Cancer Research.2005

[5]赵胜梅.淋巴细胞MHC-I在乳腺癌患者中的表达变化及其对CTL功能的影响[D].山东大学,2010.