CTLL-2小鼠T淋巴细胞

CTLL-2小鼠T淋巴细胞

产品基本信息

细胞名称：CTLL-2小鼠T淋巴细胞

种属来源：小鼠

组织来源：T 细胞

细胞形态：淋巴母细胞样

生长特性：悬浮生长

培养基: RPMI-1640+10% FBS+100IU/ml IL2或mouseIL2+1% P/S

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周 2-3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

注意：1、该细胞复苏、二天死亡下降到10%正常，一般第四天恢复。

2、细胞一三五传代，按0.02M/ml-0.02M/ml-0.015M/ml 铺瓶

3、需及时传代，密度超过0.5M/ml，24H后细胞大量死亡

4、养4个月，约传代50次

5、冻存密度应达到6-10M/管

细胞培养操作

1)复苏细胞：将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL 20%FBS含200IU IL2的培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3-5 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后轻轻吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜)。第二天换液(培养基补足到10ml，加入100IU IL2)并检查细胞密度。

2)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

收集细胞，1000RPM条件下离心3-5min分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按0.02M/ml的密度分到含新培养基的新皿中或者瓶中。

在IL2充分的情况下，细胞生长旺盛，隔天细胞数翻10倍以上，需及时传代，密度超过0.5M/ml,24H后细胞大量死亡。

3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，然后进行细胞计数。

b、根据细胞数量对应加入无血清细胞冻存液，使细胞密度6-10M/管，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

培养注意事项

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的完全培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。

悬浮细胞收货注意事项：

1、收货时需镜下拍照(看密度、状态)

2、静置后需镜下拍照(看整体密度)

a.如密度50%以下，建议换液并竖瓶培养

b.如密度50%-80%，建议换液培养，隔天观察密度

c.如密度90%，建议传代

3、换液及传代处理前，培养瓶竖着放置至少半小时(使细胞沉到瓶底);收集上清，必须将瓶内所有培养基(70ml)全部收集!并用PBS(10ml)润洗瓶底并收集!离心转速为1000rpm，3-5min。