大鼠肾动脉内皮细胞的应用

背景^[1-3]

大鼠肾动脉内皮细胞取自新鲜大鼠肾动组织，按照标准操作流程分离培养。

大鼠肾动脉内皮细胞

制备及培养方法：

1．将大鼠颈椎脱臼或颈动脉放血处死后，将整个大鼠泡于75%乙醇中消毒1min。在无菌状态下，逐层剪开胸腔，分离取出主动脉，放含无菌D-Hanks液培养皿中；

2．用眼科剪、镊尽量去除血管外膜的脂肪和纤维组织。然后，用含抗生素的D-Hanks液冲洗血管的外表面及血管腔内的凝血数次，再放入另一无菌培养皿中；

3．用眼科剪纵向剪开血管，平展在培养皿中。用非常锐利的手术刀将其切成1.5mm×1.5mm大小的动脉植块，然后种植到培养瓶或培养皿中（培养瓶或皿用1%明胶预置4℃下过夜，使用前2h移入37℃，5%CO2培养箱中。用时可以先经含20%小牛血清的M199或RPMI1640培养液冲洗）。将动脉植块的内膜面与瓶底（或皿底）接触，种植密度约为1块/cm2；

4．置37℃，5%CO2培养箱中（湿度100%）静置2h（干贴壁）。培养瓶皿若不用明胶包被则为0.5—1h。然后，加入少许含20%小牛血清的M199培养液或RPMI1640培养液（pH7.2），液量以略盖过动脉植块内膜面，而又不使植块漂浮为宜；

5．72h后，当细胞达一定密度时，将动脉植块除去。换培养液1次。以后每2d换液1次，每次换1/2—2/3的液量。继续培养8—10d，细胞融合成单层，即可传代。

应用^[4][5]

用于胰岛素抵抗大鼠的动脉内皮细胞间粘附因子-1和血管间粘附因子-1及心肌细胞白介素-18表达关系研究

应用高脂饮食制备胰岛素抵抗大鼠动物模型,测定血清胰岛素,检测细胞间粘附因子-1、血管间粘附因子-1在动脉内皮细胞及白介素-18在心肌细胞的表达。观察在高脂饮食大鼠动脉内皮细胞中细胞间粘附因子-1、血管间粘附因子-1和心肌细胞白介素-18表达关系以及在胰岛素抵抗促进糖尿病心肌病发生发展的作用。

方法：20只雄性Wistar大鼠适应性饲养1周后,随机分为空白对照组与高脂饮食组,分别给予基础饲料或高脂饲料8周,每周测定一次体重。应用高血浆胰岛素-正常血糖钳夹技术证明大鼠胰岛素抵抗的存在。

取大鼠心肌组织进行免疫组化检测,左心室取血进行血清指标检测。测定各组大鼠血清胰岛素水平,并应用免疫组化技术测定细胞间粘附因子-1、血管间粘附因子-1在动脉内皮细胞的表达和白介素-18在心肌细胞中的表达。所有数据应用SPSS13.0软件进行统计分析,比较两组间各项指标的差异,并进行相关分析。

结果：空白对照组空腹血糖（FBG）5.01±0.20mmol/L,血清胰岛素浓度1.41±0.44mmol/L,葡萄糖输注率（GIR）14.42±0.69mg/kg.min;高脂饮食组FBG 5.33±0.20mmol/L,血清胰岛素浓度2.23±0.85mmol/1,GIR 9.40±1.29mg/kg.min。两组FBG均在正常范围内,但高脂饮食组较空白对照组增高（P＜0.05）,血清胰岛素浓度高脂饮食组较空白对照组显著增加,但其GIR较空白对照组显著降低。应用高血浆胰岛素-正常血糖钳夹技术证明,高脂饮食组存在胰岛素抵抗,而空白对照组未出现胰岛素抵抗。

参考文献

[1]Advanced oxidation protein products in obese women:its relation to insulin resistance and resistin[J].Clinical and Experimental Medicine.2007(4)

[2]Inhibition of p38 mitogen-activated protein kinase attenuates left ventricular dysfunction by mediating pro-inflammatory cardiac cytokine levels in a mouse model of diabetes mellitus[J].Diabetologia.2006(10)

[3]Insulin Resistance and Chronic Cardiovascular Inflammatory Syndrome[J].JoséManuel Fernández-Real,Wifredo Ricart.Endocrine Reviews.2003(3)

[4]Evidence that tumor necrosis factor-alpha[ndash]induced hyperinsulinemia prevents decreases of circulating leptin during fasting in rats[J].Edward A.Medina,Kent L.Erickson,Kimber L.Stanhope,Peter J.Havel.Metabolism.2002(9)

[5]贺晓磊.胰岛素抵抗大鼠的动脉内皮细胞间粘附因子-1和血管间粘附因子-1及心肌细胞白介素-18表达关系[D].中国医科大学,2009.