大鼠肾动脉内皮细胞

大鼠肾动脉内皮细胞取自新鲜大鼠肾动组织，按照标准操作流程分离培养，可用于胰岛素抵抗大鼠的动脉内皮细胞间粘附因子-1和血管间粘附因子-1及心肌细胞白介素-18表达关系研究。 1．将大鼠颈椎脱臼或颈动脉放血处死后，将整个大鼠泡于75%乙醇中消毒1min。在无菌状态下，逐层剪开胸腔，分离取出主动脉，放含无菌D-Hanks液培养皿中；

2．用眼科剪、镊尽量去除血管外膜的脂肪和纤维组织。然后，用含抗生素的D-Hanks液冲洗血管的外表面及血管腔内的凝血数次，再放入另一无菌培养皿中；

3．用眼科剪纵向剪开血管，平展在培养皿中。用非常锐利的手术刀将其切成1.5mm×1.5mm大小的动脉植块，然后种植到培养瓶或培养皿中（培养瓶或皿用1%明胶预置4℃下过夜，使用前2h移入37℃，5%CO2培养箱中。用时可以先经含20%小牛血清的M199或RPMI1640培养液冲洗）。将动脉植块的内膜面与瓶底（或皿底）接触，种植密度约为1块/cm2；

4．置37℃，5%CO2培养箱中（湿度100%）静置2h（干贴壁）。培养瓶皿若不用明胶包被则为0.5—1h。然后，加入少许含20%小牛血清的M199培养液或RPMI1640培养液（pH7.2），液量以略盖过动脉植块内膜面，而又不使植块漂浮为宜；

5．72h后，当细胞达一定密度时，将动脉植块除去。换培养液1次。以后每2d换液1次，每次换1/2—2/3的液量。继续培养8—10d，细胞融合成单层，即可传代。