弹性蛋白酶的提取方法

弹性蛋白酶，广泛存在于哺乳动物胰脏，弹性蛋白酶的水解机制，是首先使弹性蛋白质的结构变疏松并溶解，对甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)残基有很高的水解，将已溶解的弹性蛋白质降解成可溶的多肽及氨基酸。

用途

胰弹性酶原合成于胰脏的腺泡组织，经胰蛋白酶或肠激酶激活后才成为活性酶。人胰每克含0.3-6.2单位弹性酶，牛、猪胰弹性酶含量大约高5倍。

弹性蛋白酶经济价值极高，在医药方面主要作为治疗药物:

(I)治疗高血脂症:(2)防治动脉粥样硬化:(3)抑制脂肪肝发展:(4)治疗慢性气管炎及其它结缔组织纤维增生性疾病:(5)外用于消除皮肤焦痂、碎肩，用于烧伤患者的治疗以及皮肤溃疡、口腔溃疡等症。

提取方法

药用的弹性蛋白酶主要从猪胰脏中提取，目前，我们通过检索发现弹性蛋白酶的提取分离技术多采用离子交换树脂从胰脏提取液分离精制而得，如南昌市浩然生物医药有限公司公开了《从猪胰脏中提取纯化弹性蛋白酶》专利(申请号:200810107092.8)，常州千红生化制药有限公司纯化弹性蛋白酶的方法(申请号:200710020819.4)专利，均采用树脂进行纯化，树脂的价格昂贵，使大规模工业化生产成本高。

而本发明是灵活运用胰酶水解、丙酮沉淀、磷酸缓冲液盐溶、硫酸铵盐析等现代蛋白纯化技术，使用磷酸盐、丙酮、硫酸铵等价格便宜的辅料，制备弹性蛋白酶，不仅在一定程度上降低了成本，且产品的收率也能达到15万单位/kg胰脏。

发明内容

本发明的目的是从合格的动物胰脏中提取弹性蛋白酶。

本发明的技术方案是:将合格的动物胰脏经过绞碎后，灵活运用胰酶水解、丙酮沉淀、磷酸缓冲液提纯及硫酸铵盐析结晶等现代蛋白纯化技术，制备弹性蛋白酶的方法。本发明操作简单、成本低，非常适合于规模化大生产。包括如下步骤:

(I)水解:将新鲜或冷冻猪胰脏绞碎置于容器中，加入2〜5倍量(TC以下的丙酮，在O°C左右搅拌脱水0.5〜1.5小时，离心得沉淀物，加入0.5〜1.5倍量的水及0.01〜0.02倍量胰酶搅拌溶解，用6%〜10 %氢氧化钠溶液调至pH值至6.0〜9.0，于15°C〜25°C保温搅拌I〜3小时，再加入娃藻土充分搅拌，过滤。

(2)沉淀:收集滤液与1.5〜3倍量丙酮搅匀，静置10〜14小时，虹吸弃去上层丙酮清液，用1.5〜2倍量丙酮分3〜4次洗涤沉淀物，过滤甩干，干燥，即得弹性蛋白酶粗品。

(3)提纯:将粗品与45〜60倍量磷酸缓冲液搅拌0.5〜1.5小时，于15°C〜25°C静置15〜25小时，按照溶液的体积加入其量约3%〜7%的硅藻土拌匀，过滤;往滤液中加入硫酸钱，至硫酸钱浓度达35%〜45%。过滤，得盐析物;将盐析物再按Ig: 8〜1ml的比例溶于碳酸缓冲液，然后在搅拌下逐滴加入饱和硫酸铵溶液，直至微浑，O °C〜8 °C下静置48〜72小时，慢慢形成针状结晶，过滤。

 (4)干燥:滤取晶体并用水冲洗3〜5次，冷冻干燥，即可得弹性蛋白酶。