诱惑红标准物质的制备和含量检测

背景及概述^[1-2]

诱惑红是食用色素的一种，呈鲜艳的深红色，单色品种。该色素稳 定性优良，被广泛用于食品、饮料、药品、化妆品、饲料、烟草、玩具、 食品包装材料等的着色。水溶性合成色素，鲜艳的深红色，应用于糖果 包衣、冰淇淋、雪糕、糖果、糕点、饮料等的着色。

诱惑红为深红色均匀粉末，无臭。溶于水，可溶于甘油和丙二醇，微溶于乙醇，不溶于油脂。溶于水呈微带黄色的红色溶液。耐光、耐热性强，耐碱及耐氧化还原性差。性质类似于其他重氮型红色素。对含二氧化硫或氢离子(pH≥3)的水溶液耐受性佳。着色牢度强。溶于水，中性和酸性水溶液呈红色，碱性呈暗红色。

诱惑红为水溶性合成色素，呈鲜艳的深红色，广泛应用于糖果包衣、冰淇淋、雪糕、糖果、糕点、饮料等的着色。我国《食品添加剂使用卫生标准》(GB 2760‑1996)规定：用于糖果包衣时使用量为0.085g/kg，用于冰淇淋时使用量为0.07g/kg，用于炸鸡调料时使用量为0.4g/kg。

标准物质制备^[3]

称取食品添加剂级诱惑红样品(来自上海染料研究所)2.15g，加入 40ml去离子水，配制成约0.05g/ml的诱惑红水溶液。称取100g Sephadex LH‑20凝胶，加入300ml色谱级甲醇溶胀15min，待凝胶充分溶胀后进行 装柱(约2米长)，并用去离子水和色谱级甲醇交替清洗凝胶，重复3次。

将配制好的诱惑红水溶液进行上样，以去离子水作为流动相进行凝胶 过滤色谱分离，控制色谱柱的温度为20℃，调节流动相的流速为3ml/min， 每个流分接液50ml，将所接流分均进行密封避光保存。

对所有流分进行HPLC检测，其中检测条件为：色谱柱：GRACE Apollo C18(250mm×4.6mm 5μm)；流动相：甲醇/0.08M乙酸铵水溶液 (30/70)；流速：1.0ml/min；检测波长：254nm和540nm；柱温：40℃； 进样量：5μl。发明人意外地发现，其中第6流分含有纯度达到99％以上 的诱惑红，经真空冷冻干燥机进行冷冻干燥，得到纯度为99％以上的干 燥诱惑红标准物质。

对于含有较低纯度诱惑红的其它流分，还可以 通过再次进行上述凝胶过滤色谱得到进一步纯化，从而获得更多的纯度为 99％以上的诱惑红。

含量检测^[4]

(1)聚磺基水杨酸-三联吡啶钌修饰的玻碳电极的制备

将玻碳电极置于含1.0×10^-2mol/L磺基水杨酸与1.0×10^-4mol/L三联吡啶钌的水溶液中，采用循环伏安法进行电聚合，在-1.5～+2.0V的电位范围内，扫速0.1V/s，扫描10～30圈，取出晾干后得到修饰电极。

(2)标准曲线的绘制

将步骤(1)制备的修饰电极作为工作电极，饱和甘汞电极作为参比电极，铂电极作为辅助电极，组成三电极体系，并以pH＝10的0.1mol/L PBS缓冲液为空白溶液检测发光强度，将该三电极体系置于含有不同浓度诱惑红(1.0×10^-7mol/L，5.0×10^-7mol/L，1.0×10^-6mol/L，5.0×10^-6mol/L，1.0×10^-5mol/L，5.0×10^-5mol/L和1.0×10⁴mol/L)pH＝10的PBS缓冲溶液中，在0.1V到1.5V的电位范围内进行循环伏安法扫描，光电倍增管电压为800V，在此条件下，记录E-ECL曲线，并读出发光强度峰值。所得数据经统计后，以诱惑红的浓度为横坐标，空白溶液和诱惑红的发光强度差值为纵坐标，绘制标准曲线，进而获得相应的线性回归方程。上述方程的线性范围为1.0×10^-7～1.0×10^-4mol/L，根据本发明所用玻碳电极的直径为3mm，检测限为0.6×10^-7mol/L。

(3)样品的检测

选取市售的西瓜饮料试样1.0mL置于100mL容量瓶中，用pH＝10的0.1mol/L PBS缓冲溶液定容至100mL，取20mL所得溶液用于电化学发光检测，按照与步骤(2)相同的电化学测试方法对待测样品溶液进行测试，以获得ECL发光强度值及其与空白溶液发光强度值差值，所得发光强度值差值用步骤(2)所得标准曲线所对应的线性回归方程计算出待检测样品中诱惑红的浓度。

参考文献

[1] 诱惑红产品介绍

[2] [中国发明] CN201110035545.2 用于检测诱惑红的方法及酶联免疫试剂盒

[3] [中国发明,中国发明授权] CN201010541188.2 一种诱惑红标准物质及其制备和应用

[4] [中国发明,中国发明授权] CN201611027826.2 一种固定三联吡啶钌及电化学发光检测诱惑红的方法