小鼠5羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠5羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠5羟色胺（5-HT）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠5羟色胺（5-HT）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

小鼠5羟色胺(5-HT)ELISA检测图

样品收集、处理及保存方法

1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

操作步骤

1. 从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3. 待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；

4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于桥本甲状腺炎对妊娠期小鼠海马5-羟色胺的影响研究

通过建立甲状腺功能正常的桥本甲状腺炎妊娠小鼠模型,观察桥本甲状腺炎对妊娠小鼠旷场行为及海马内5-HT和受体表达水平的影响。

方法将70只5～6周龄NOD雌性小鼠,16只NOD雄性小鼠,适应性喂养一周。将雌性小鼠随机分为正常怀孕组（CON组）、HT怀孕组（HT组）。通过猪甲状腺球蛋白（pTg）联合弗氏佐剂2次诱导免疫建立HT小鼠模型。

步骤:称取25μg猪甲状腺球蛋白（pTg）溶于100μl生理盐水溶液中,注射器吸取完全弗氏佐剂（CFA）按1:1比例与pTg溶液混合于研钵中,冰浴条件下研磨至完全乳化。

在HT组小鼠尾根部1cm处皮下注射0.1 ml乳化剂。CON组注射含有等量生理盐水的CFA乳化剂。14 d后将CFA替换成不完全弗氏佐剂（IFA）,与pTg混合制备成乳化液,同样操作方法在HT组小鼠尾根部1 cm处皮下注射0.1 ml。CON组注射等量不含pTg的IFA乳化剂。

7周后将2组小鼠分别以2:1比例随机与雄鼠合笼,交配10-12 h,雌鼠在阴道口形成阴道栓,视为交配成功,每组各随机选取16只孕鼠进行实验。

通过旷场实验观察小鼠在新异环境中自主行为、探究行为与情绪反应;实验结束后通过电化学发光免疫法、酶联免疫吸附法测定血清甲状腺激素及抗体水平;甲状腺HE染色;酶联免疫吸附法检测各组小鼠海马5-HT含量;Western blot及免疫组织化学法观察各组小鼠海马5-HT2CR含量及分布情况。

统计分析应用SPSS 17.0软件,采用两独立样本t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。结果1.旷场实验:与CON组相比,HT组小鼠在旷场中央区停留时间明显算短,差异有统计性学意义（P<0.01）。

参考文献

[1]Neuronal cell death.Fricker M,Tolkovsky AM,Borutaite V,Coleman M,Brown GC.Physiological Reviews.2018

[2]Monoamine modulation of the synaptic inhibition in the hippocampus.Bijak M.Acta neurobiologiae experimentalis.1996

[3]A case control study on psychiatric disorders in Hashimoto disease and euthyroid goitre:not only depressive but also anxiety disorders are associated with thyroid autoimmunity.Carta Mauro,Hardoy Maria,Carpiniello Bernardo,Murru Andrea,Marci Anna,Carbone Fiora,Deiana Luca,Cadeddu Mariangela,Mariotti Stefano.Clinical Practice and Epidemiology in Mental Health.2005

[4]Advances in Basic Research and Clinical Practice.J.P.Feighner,W.F.Boyer.John Wiley&Sons Ltd.1996

[5]夏琴.桥本甲状腺炎对妊娠期小鼠海马5-羟色胺的影响[D].安徽医科大学,2020.