小鼠5羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒

小鼠5羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠5羟色胺（5-HT）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。 用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠5羟色胺（5-HT）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

1. 从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3. 待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；

4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。