BEL-7402人肝癌细胞的应用

背景^[1-3]

BEL-7402人肝癌细胞是于1974年从临床肝癌手术标本中建立的；BEL-7402细胞群体倍增时间为20小时，移植到处理过的Wistar大鼠中的能形成肿瘤结节，BEL-7402细胞形态呈上皮样细胞。

在电子显微镜下，BEL-7402细胞亦显示上皮细胞所具有的桥粒和张力原纤维，与临床肝癌细胞相似。BEL-7402细胞分瓶培养第四天时，其有丝分裂指数约为7%。BEL-7402细胞的染色体数为不足三倍体，有一个异常的近端着丝点染色体。间接免疫荧光法测BEL-7402细胞内的AFP为阳性反应；LDH同工酶谱显示，BEL-7402细胞与成年人肝细胞不同，而与人胚肝及临床肝癌相近。

细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。

应用^[4][5]

用于姜黄素对人肝癌细胞BEL-7402中环氧合酶-2表达影响的研究

探讨姜黄素（curcumin，Cur）对人肝癌细胞BEL-7402中环氧合酶（cyclooxygenase，COX）-2表达的影响。

方法1、以不同浓度的姜黄素（0μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L）处理人肝癌细胞BEL-7402，CCK-8法分析细胞增殖，采用RT-PCR和western blot方法检测人肝癌细胞BEL-7402中COX-2的表达。

2、以10μmol/L姜黄素、特异性COX-2抑制剂NS-398200μmol/L＋10μmol/L姜黄素处理人肝癌细胞BEL-7402，RT-PCR和western blot检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）mRNA、蛋白表达。

结果1、不同剂量的姜黄素（2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L）对肝癌细胞增殖率的影响与对照组（0μmol/L）相比差异有统计学意义（P<0.01）；

2、随着姜黄素浓度的增加，COX-2mRNA表达逐渐降低，与对照组（0μmol/L）相比差异有统计学意义（P<0.01）；

3、随着姜黄素浓度的增加，COX-2蛋白表达逐渐降低，与对照组（0μmol/L）相比差异有统计学意义（P<0.01）；

4、姜黄素10μmol/L组、NS-398200μmol/L组+姜黄素10μmol/L组与对照组相比，VEGFmRNA、VEGF蛋白表达均降低，差异有统计学意义（P<0.01），NS-398200μmol/L组+姜黄素10μmol/L组与姜黄素10μmol/L组相比，VEGF mRNA、VEGF蛋白表达降低，差异有统计学意义（P<0.01）。

参考文献

[1]COX-2 Signaling and Cancer:New Players in Old Arena[J].Shashank Misra,Kulbhushan Sharma.Current Drug Targets.2014(3)

[2]Systems Biology Approaches to Pancreatic Cancer Detection,Prevention and Treatment[J].Osama M.Alian,Philip A.Philip,Fazlul H.Sarkar,Asfar S.Azmi.Current Pharmaceutical Design.2014(1)

[3]H2S inhibition of chemical hypoxia-induced proliferation of HPASMCsis mediated by the upregulation of COX-2/PGI2[J].Yunquan Li,Guohui Liu,Dianqi Cai,Baoying Pan,Yuese Lin,Xuandi Li,Shujuan Li,Ling Zhu,Xinxue Liao,Huishen Wang.International Journal of Molecular Medicine.2014(2)

[4]Sanguinarine inhibits invasiveness and the MMP?9 and COX?2 expressionin TPA-induced breast cancer cells by inducing HO-1 expression[J].Sun Park,Mei Jin,Young Kim,Sang-Joon Lee,Geuntae Park.Oncology Reports.2014(1)

[5]李帅帅.姜黄素对人肝癌细胞BEL-7402中环氧合酶-2表达影响的研究[D].辽宁医学院,2014.