标准绵羊血清(碳吸附过滤)的应用

背景^[1-3]

标准绵羊血清(碳吸附过滤)是绵羊血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞的起到某些保护作用。

标准绵羊血清(碳吸附过滤)经无菌采集、批量混合，最终过3次0．1um过滤分装而成在经过生物碳吸附补体等有害物质。标准绵羊血清(碳吸附过滤)适合于单抗研制、较常规的原代和传代细胞培养、规模化培养的疫苗生产。

碳吸附过滤根据吸附过程中，活性炭分子和污染物分子之间作用力的不同，可将吸附分为两大类;物理吸附和化学吸附(又称活性吸附)。在吸附过程中，当活性炭分子和污染物分子之间的作用力是范德华力(或静电引力)时称为物理吸附;当活性炭分子和污染物分子之间的作用力是化学键时称为化学吸附。

物理吸附的吸附强度主要与活性炭的物理性质有关，与活性炭的化学性质基本无关。由于范德华力较弱，对污染物分子的结构影响不大，这种力与分子间内聚力一样，故可把物理吸附类比为凝聚现象。物理吸附时污染物的化学性质仍然保持不变。

碳吸附型血清是一款低水平类固醇类的血清产品，通过碳吸附可降低血清中许多激素及生长因子的浓度，如雌二醇、皮质醇、皮质酮、B类维生素、T3、T4、前列腺素等，该血清适用于上述一些分子可能干扰实验结果的实验中对于那些需要这些分子的细胞培养，可能降低细胞生长性能。

应用^[4][5]

用于Lnc-SEMT促进绵羊肌肉分化生成的功能研究

通过高通量测序的手段筛选到一个的可以促进绵羊肌肉细胞分化,促进成肌生成的LncRNA分子(命名为Lnc-SEMT),试验分析发现它对骨髂肌发育具有重要调控作用.该分子的研究为阐明动物肌细胞的增殖、分化的分子机制具有重要意义,并可为肉羊分子辅助育种和开发新型的促生长制剂提供科学依据和技术支持。

1. 通过对胚胎期90口和120日龄绵羊背最长肌样品进行高通量测序,共计得到1114个lncRNA,其中466个lncRNA差异表达,而466个差异表达的lncRNA中,其中157个lncRNA上调,309个lncRNA下调。

2. 通过对测序得到的1114个lncRNA进行芯片验证,发现有867个预测的lncRNA存在,其中有119个lncRNA的表达上调,对这119个lncRNA进行定量筛选后,得到了一个在骨骼肌组织中特异性高表达的上调LncRNA(命名为Lnc-SEMT)。

3. 通过检测绵羊不同生长时期的Lnc-SEMT表达水平发现,在胚胎期120日龄时,其表达量最高,出生后逐渐降低,成年后表达水平变化不大。

4. 通过检测绵羊成肌细胞生长分化过程中的lncRNA表达量变化,在成肌细胞分化0-5天内,随着成肌细胞的生长分化,MYOG和MYOD基因表达水平也随着升高。

5.构建了Lnc-SEMT的高表达和干扰载体,分别转染到绵羊成肌细胞,通过DAPI和MyHC试验分析,结果表明随着成肌细胞分化过程中Lnc-SEMT的过表达和干扰,MYOG,MYOD等基因随着Lnc-SEMT的变化而变化。

参考文献

[1]Systematic Characterization of Long Non-Coding RNAs Reveals the Contrasting Coordination of Cis-and Trans-Molecular Regulation in Human Fetal and Adult Heart[J].Chunjiang He,Hanyang Hu,Kitchener D.Wilson,Haodi Wu,Jing Feng,Siyu Xia,Jared Churko,Kun Qu,Howard Y.Chang,Joseph C.Wu.Circulation:Cardiovascular Genetics.2016

[2]A Micropeptide Encoded by a Putative Long Noncoding RNA Regulates Muscle Performance[J].Douglas M.Anderson,Kelly M.Anderson,Chi-Lun Chang,Catherine A.Makarewich,Benjamin R.Nelson,John R.McAnally,Prasad Kasaragod,John M.Shelton,Jen Liou,Rhonda Bassel-Duby,Eric N.Olson.Cell.2015(4)

[3]From Discovery to Function:The Expanding Roles of Long NonCoding RNAs in Physiology and Disease[J].Miao Sun,W.Lee Kraus.Endocrine Reviews.2015(1)

[4]New insights into polar overdominance in callipyge sheep[J].C.A.Bidwell,J.N.Waddell,T.M.Taxis,H.Yu,R.L.Tellam,M.K.Neary,N.E.Cockett.Anim Genet.2014

[5]吴明明.Lnc-SEMT促进绵羊肌肉分化生成的功能研究[D].中国农业大学,2016.